白术ISSR与质量研究

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目的:摸索适合白术基因组DNA提取方法,筛选白术ISSR引物,建立ISSR-PCR反应体系,检测白术ISSR分子标记,分析不同产地白术的遗传关系与白术多糖含量指标的变化情况,从而为白术的遗传育种,品种改良提供科学参考。  方法:采用改良CTAB法和常规SDS法两种方法对比提取白术基因组DNA,运用单因素影响试验建立ISSR-PCR反映体系,通过NTSYS-pc version-2.11f计算机软件构建聚类树状图,结合紫外分光法检测白术多糖含量,对8个产地的白术(陕西延安,西安,四川,安徽,浙江,湖南怀化,贵阳,贵州铜仁)遗传关系和质量进行分析研究。  结果:1.本实验通过不同水浴时间,不同的CTAB与SDS浓度,不同的离心转速对基因组 DNA提取进行了分析,从而获得了最适合白术的ISSR-PCR反应体系为改良CTAB法提取基因组DNA。其OD值在1.8~1.9范围内,表明其为高纯度的DNA。  2.通过紫外分光光度法,检测多糖的吸收峰为490nm,建立标准曲线.测定样品吸光度,计算白术多糖含量分布在6.37%~32.6%之间,显示出8个产地白术之间的多糖含量差异较大。  3.采用优化的白术ISSR-PCR的最佳反应体系从菊科中的众多引物中筛选出3条用于指纹图谱构建的引物:ISSR-18、ISSR-24、ISSR-36。计算每个引物的条带数,从而获得白术居群的相似系数。用 NTSYS-pc version-2.11f软件计算任意样品间的遗传相似度、遗传距离,构建聚类图。聚为2类:陕西延安,西安,四川,安徽,浙江聚为一类;湖南怀化,贵阳,贵州桐仁聚为一类。  结论:在白术的生长繁殖过程中、由于环境、气候等地理因素的不同,来自不同产地的白术基因组DNA之间有差异,遗传相似度、遗传距离、亲缘关系不同,其白术多糖成分含量也随之有所变化,遗传关系相近,则它们多糖含量也很接近。
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