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目的:建立中国莱姆病Borrelia afzelii基因型感染蛋白免疫印迹法诊断方法及其标准化操作程序。方法:(1)选择中国Borrelia afzelii代表菌株FP1作为抗原出发菌,采用SDS-PAGE、电转移和免疫印迹等技术,并使用Gel-Pro凝胶分析软件确定其主要蛋白条带。(2)用WB方法分别检测451份(包括莱姆病病例159份,健康人105份,梅毒患者58份,01型钩端螺旋体患者75份,类风湿性关节炎患者54份)血清标本的IgG、IgM抗体。(3)运用χ~2检验或Fisher精确检验比较病例组和对照组各组蛋白条带的频数分布,用Roc曲线、Youden指数分析各种蛋白条带组合,结合临床病例实际情况,确定最合适的蛋白组合做为阳性诊断方法。(4)与国内Borrelia garinii及国外Borrelia afzelii蛋白免疫印迹法诊断方法比较。(5)同时检测398例疑似病人标本,对IFA、ELISA和WB三种方法进行比较。结果:(1)代表菌株FP1的主要蛋白条带有P83/100、P75、P66、P60、P58、P43、P41、P39、OspB、OspA、P30、P28、OspC、P17和P14。(2)Roc曲线分析发现对于IgG蛋白条带P83/100、P58、P39、OspB、OspA、P30、P28、OspC、P17和P14为最佳组合,其中至少有一条蛋白条带显色即可诊断为阳性;而IgM蛋白条带最佳组合为P83/100、P58、P39、OspA、P30、P28、OspC、P17和P41,其中至少有一条蛋白条带显色则可诊断为阳性。但是,如果仅P41蛋白条带阳性,应排除梅毒和钩端螺旋体感染。(3)此方法用于检测IgG抗体灵敏度为69.8%,特异度为98.3%,Youden指数为0.681;而检测IgM抗体灵敏度为47%,特异度为94.2%,Youden指数0.412。(4)IFA、ELISA、WB三种方法分别对398例疑似病人的检测结果:ELISA阳性87例,其中IgM阳性25例(6.28%),IgG阳性58例(14.57%),两者皆阳性为4例(1.01%);IFA阳性85例,其中IgM阳性23例(5.78%),IgG阳性55例(13.82%),两者皆阳性为7例(1.76%);WB阳性85例,其中IgM阳性30例(7.54%),IgG阳性49例(12.31%),两者皆阳性6例(1.51%);并且实验表明在对于游走性红斑病例的诊断上,WB方法阳性率(26.15%)明显高于ELISA(9.23%)和IFA(10.76%)(χ~2=7.69 P<0.05)(5)WB IgG诊断方法中Borrelia afzelii基因型的灵敏度和特异性低于Borreli garinii,而在IgM诊断方法Borrelia afzelii WB的灵敏度低于Borreli garinii WB而特异性高于它;与国外的Borrelia afzelii基因型WB诊断方法比较发现其WB IgG的灵敏度和特异都高于其,而WB IgM的灵敏度高其,而特异性则相反。结论:我国Borrelia afzelii基因型莱姆病检测的WB阳性诊断方法为:对于IgG抗体,如是P83/100、P58、P39、OspB、OspA、P30、P28、OspC、P17和P14中至少有一条蛋白条带显色即可诊断为阳性;对于IgM抗体,如果P83/100、P58、P39、OspA、P30、P28、OspC、P17和P41中至少有一条蛋白条带显色则可诊断为阳性;但IgM抗体检测中如果仅P41显色,则应该排除梅毒和钩体感染,方可诊断。