塞来昔布对体外幽门螺杆菌诱导GES-1转化细胞抑制作用的研究

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目的:体外培养幽门螺杆菌(Hp)诱导人永生性胃上皮细胞株(GES-1)转化细胞;研究选择性环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对Hp诱导的GES-1转化细胞是否具有抑制增殖、诱导凋亡的作用,为塞来昔布应用于胃癌的预防提供实验基础和理论依据。方法:1、在体外将幽门螺杆菌悉尼株(SS1)与GES-1细胞按1:1共培养2个月,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、平板克隆形成实验检测细胞转化情况,培养GES-1转化细胞;2、用不同浓度(0,25,50,75,100,125,150μmol/L)的塞来昔布作用于GES-1转化细胞24h,48h,72h,MTT法筛选合适浓度范围并检测其对GES-1转化细胞增殖能力的影响,用合适浓度范围内不同浓度的塞来昔布作用于GES-1转化细胞后,分别利用免疫细胞化学法检测Ki-67、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率观察塞来昔布对GES-1转化细胞的增殖及凋亡的影响。结果:1、相差显微镜下,GES-1细胞与Hp (SS1)共同培养2个月后细胞出现形态学变化,表现为细胞大小不等,形状不规则,细胞体积增大,偶见巨细胞,形态不规则,细胞核增大,核仁增多,出现病理核分裂象,也可见少量漂浮细胞,我们称之为GES-1转化细胞。2、MTT法检测GES-1转化细胞24h、48h、72h的OD值分别为0.255±0.006,0.347±0.078,0.727±0.096,均高于GES-1对照细胞(0.225±0.014,0.245±0.041,0.490±0.046),差异均有统计学意义。3、GES-1转化细胞克隆形成数(52.67±10.29)及克隆形成率(26.3%)均高于GES-1对照细胞(27.17±8.47,13.6%),差异有统计学意义(t=4.687,P=0.001)。4、用不同浓度(0,25,50,75,100,125,150μmol/L)的塞来昔布作用于GES-1转化细胞24h,48h,72h,MTT法筛选显示:作用时间为24h时塞来昔布合适浓度范围在[75,100]μmol/L,作用时间为48h时塞来昔布合适浓度范围在[50,100]μmol/L,作用时间为72h时塞来昔布合适浓度范围在[25,100]μmol/L,且随着塞来昔布浓度(50、75、100μmol/L)的增加,塞来昔布对转化细胞增殖的抑制率升高,呈剂量依赖性,差异有统计学意义。5、终浓度分别为0、50、75、100μmol/L的塞来昔布作用于GES-1转化细胞48h后,用免疫细胞化学法检测其Ki-67表达量逐渐减少,分别为(13.374±2.084)%,(9.974±2.169)%,(7.014±2.328)%,(3.907±1.896)%,差异有统计学意义(P<0.05)。6、终浓度分别为0、50、75、100μmol/L的塞来昔布作用于GES-1转化细胞48h后,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率逐渐增高,分别为(5.242±2.139)%,(23.098±9.436)%,(39.616±12.405)%,(64.342±8.403)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、幽门螺杆菌长期作用于胃上皮细胞,细胞形态会发生改变,出现增殖能力增强,并可以诱导其转化。2、塞来昔布可抑制GES-1转化细胞的增殖,并促进其凋亡,并具有浓度依赖性,揭示了塞来昔布对GES-1转化细胞的作用,为今后塞来昔布应用于临床延缓胃癌的发生提供实验依据。
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