右归丸干预老龄肾阳虚体质分子调控机制研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:xiangqi520
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目的:探讨右归丸对老龄肾阳虚体质干预的分子调控机制,为临床上肾阳虚的防治以及右归丸的运用提供科学依据。方法:(1)采用肾阳虚证辨证因子评分细则表,对右归丸(9g/次,日三次)治疗28天的老龄肾阳虚体质者进行半定量的疗效评价。(2)采用miRNA表达谱芯片技术对老龄肾阳体质者治疗前(阳虚组)、治疗后(治疗组)、健康对照组这三组的miRNAs进行检测,并比较分析三组中差异表达miRNAs。(3)根据差异表达miRNAs在三组中具体表达量的改变、结合中医肾阳虚衰和Pubmed中文献报道的相关性,筛选出目的miRNAs,并采用qRT-PCR技术进一步验证分析。(4)对筛选出的目的miRNAs,通过TargetScan软件进行靶基因预测,以Total context+scores<-0.6core, Aggregate PCT>0.8为靶基因筛选标准。(5)采用焦磷酸测序技术对目的miRNAs预测的靶基因和前期筛选的肾阳虚免疫相关基因(共10条基因)的甲基化水平进行检测,并比较分析三组中甲基化水平差异的基因。(6)采用qRT-PCR技术对目的miRNAs预测的靶基因和前期筛选的肾阳虚免疫相关基因(共10条基因)进一步验证分析。结果:(1)右归丸对老龄肾阳虚体质干预有效,尤其以其“腰膝酸痛”、“畏寒怕冷”、“四肢发冷”、“腰背发冷”、“小便频多”的症状改善明显,以“下肢水肿”、“大便溏稀”、“痰白清稀”改善不明显。(2) miRNA表达谱芯片结果显示阳虚组与健康组共有63条差异表达miRNAs,阳虚组与治疗组共有6条差异表达miRNAs,治疗组与健康组共有50条差异表达miRNAs。(3)共筛选出6条miRNAs为目的miRNAs。qRT-PCR统计结果显示5条niRNAs有统计学意义。其中在右归丸干预后,有2条基因的表达存在差异。(4)通过目的miRNAs的靶基因预测共获得6条基因。(5)焦磷酸测序统计结果显示4条基因有统计学意义,其中在右归丸干预后,有3条基因发生了甲基化增强或去甲基化的效应。(6)10条基因的qRT-PCR统计结果显示6条基因有统计学意义。结论:(1)右归丸通过温补肾阳,填精益髓的功用对“寒象”和“精亏”改善明显,但在调节机体水液方面有所欠缺;同年龄段健康者从症状上提示亦存在一定程度的肾阳不足。(2)老龄肾阳虚体质可能多与肿瘤发生、脑部功能障碍或疾病、心脏血管功能或疾病、情志疾病、生殖功能或疾病、衰老等相关,体现了肾阳虚衰,推动气化不足、藏精化精无力及心肾相关、脑肾相关的特点。(3)右归丸可能通过调节niRNAs的表达和DNA甲基化修饰的双重机制调控BMP7、DICER1、NF1、FLT1的表达,AXIN1和SSTR5可能是其发挥间接作用的靶点。(4)老龄肾阳虚体质具有相对稳定性,彻底改变可能需要一个长期的过程。本次研究提示右归丸通过温补肾阳,填精益髓,可能降低了老龄肾阳虚体质相关肿瘤、功能障碍及疾病的发生率,在延缓衰老,益寿保健的方面发挥了一定程度的防护作用。
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