目的:肝癌是消化系统发病率最高的恶性实体肿瘤之一。我国每年大约有35万的新增肝癌病例,居全球之首,严重威胁了国民身体健康和生活质量。肝癌起病隐匿,早期症状多为不典型腹痛,极易被忽略和误诊。部分患者初次就诊时即已为发展至肿瘤末期,无法进行外科手术切除,而被迫采用化疗、介入、放疗、生物治疗及中医中药治疗等多种方法结合的综合治疗。对于这部分患者而言,化疗的效果可能直接决定了其最终的生存率。5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)是临床最常用、最基础的治疗肝癌的细胞周期特异性化疗药物。亚叶酸钙(Calcium folinate,CF)是5-FU最经典的化疗增效剂,二者常联合使用。但是该方案在临床实践中被发现存在治疗安全性差、患者耐受性差、疗效不佳、易导致肿瘤耐药等问题,极大地限制了其使用。大蒜素是从大蒜中提取的天然含硫化合物。近年来大蒜素被发现具有阻滞肿瘤细胞周期、增效化疗药物等多种抗肿瘤作用。大蒜素可以增强化疗药物的效果,减少化疗药物的使用剂量,减轻药物不良反应,抑制肿瘤发生耐药,达到“高效低毒”的效果。本实验拟探讨大蒜素能否取代CF成为5-FU更好的化疗增效剂及其可能的机制。方法:将处于对数生长期的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞随机分为空白对照组,单用5-FU(100mg/L)组,低、中、高浓度大蒜素(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)+5-FU(100mg/L)组,低、中、高浓度CF(5mg/L、10mg/L、20mg/L)+5-FU(100mg/L)组。用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,并计算其增殖抑制率,选择效果最佳的大蒜素浓度组和CF浓度组继续实验。用流式细胞技术检测各组细胞的细胞周期,了解细胞周期阻滞情况。用hoechst33258染色法观察各组细胞凋亡情况,通过细胞计数得出凋亡率。用westernblot技术检测与诱导肝癌耐药密切相关的p糖蛋白(pgp)和多药耐药相关蛋白-1(mrp-1)的表达水平。所涉实验数据使用spss17.0统计软件分析,两组数据间使用t检验,p<0.05时差异有统计学意义。结果:高浓度cf+5-fu组因细胞不能耐受而大面积死亡,无法继续实验,故未纳入统计。cck-8法结果显示:单用5-fu组,低、中、高浓度大蒜素+5-fu组,低、中浓度cf+5-fu组均对人肝癌细胞smmc-7721的增殖存在抑制作用。在不同浓度梯度的大蒜素+5-fu组中,大蒜素的浓度越高对5-fu的增效作用越明显(p<0.05)。在低、中浓度cf+5-fu组中,中浓度cf对5-fu的增效作用更明显(p<0.05)。比较高浓度大蒜素+5-fu组和中浓度cf+5-fu组,高浓度大蒜素+5-fu组的抑制作用更明显(p<0.05)。联合用药的效果均强于单用5-fu(p<0.05)。故选择了效果最佳的高浓度大蒜素+5-fu组和中浓度cf+5-fu组继续完成后续实验。细胞周期检测显示:单用5-fu组、高浓度大蒜素+5-fu组、中浓度cf+5-fu组均能将人肝癌细胞smmc-7721的细胞周期阻断s期。高浓度大蒜素+5-fu组的细胞周期阻滞作用较其他两组更为明显(p<0.05)。高浓度大蒜素+5-fu组还具有明显的g2/m期细胞阻滞作用(p<0.05)。hoechst33258染色后经细胞计数得出的凋亡率提示:高浓度大蒜素+5-fu组较单用5-fu组和中浓度cf+5-fu组能够更明显地诱导肝癌细胞凋亡(p<0.05)。westernblot技术检测发现高浓度大蒜素+5-fu组较单用5-fu组、中浓度cf+5-fu组能更显著的降低pgp和mrp-1的表达水平(p<0.05)。结论:大蒜素较CF能够更有效地帮助5-FU抑制肝癌细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,使更多的肝癌细胞被阻滞在S期。且大蒜素的增效作用呈现出明显的浓度、时间依赖性。大蒜素对5-FU的增效作用可能是通过大蒜素的细胞周期阻滞作用和逆转肝癌细胞耐药来实现的。大蒜素联合5-FU有望取代CF联合5-FU成为肝癌有效、低毒的新型化疗方案。