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目的:mTOR信号与细胞的增殖、生长、代谢等活性密切相关,更为重要的是mTOR是自噬调控信号中的重要组成部分,而自噬同样与细胞的增殖等生物学功能上密切相关。然而,mTOR/自噬信号通路对瘢痕疙瘩的作用仍未阐明。本研究分析瘢痕疙瘩患者中mTOR信号通路的活化情况及细胞的自噬水平,探讨mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)和KU-0063794在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的生物学效应,进一步探究自噬机制在mTOR抑制剂发挥功能效应中的作用。方法:1.分别在瘢痕疙瘩组织水平及其成纤维细胞水平,采用免疫组织化学染色及Western Blot的方法检测mTOR和下游信号分子S6以及自噬相关蛋白LC3、ULKI、ATG7、ATG9A、ATG12的表达情况;细胞进行吖啶橙(AO)荧光染色,观察胞浆内酸性囊泡的形成情况。2.以瘢痕疙瘩成纤维细胞为研究对象,分别给予mTOR抑制剂处理,包括100 nM雷帕霉素或5 μM KU-0063794刺激不同时间点,分别通过CCK-8实验及BrdU掺入实验检测其对细胞增殖的影响;Annexin V-EGFP/PI双染通过流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,同时,Western Blot方法检测凋亡标志分子Caspase 3及PARP的剪切情况;二维细胞迁移实验检测其对细胞迁移的影响;Western Blot方法检测其对细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成的影响。3.为明确雷帕霉素和KU-0063794对瘢痕疙瘩成纤维细胞自噬流的影响,通过Western Blot方法检测加药处理后LC3的表达情况;通过加入自噬抑制剂wortmannin预处理或转染si-ATG5的方法阻断细胞自噬后,再给予雷帕霉素或KU-0063794处理不同时间点,用上述同样的方法,再次检测其对细胞增殖、迁移及胶原合成的影响。结果:1.免疫组织化学染色及Westem Blot结果显示,与对照组相比,瘢痕疙瘩组织中总mTOR、S6及p-mTOR Ser2448、p-S6 Ser235/236表达增加,自噬标志蛋白LC3表达降低;体外实验结果显示,与正常成纤维细胞相比,瘢痕疙瘩成纤维细胞中p-S6 Ser235/236、p-ULK1 Ser757表达增加而LC3表达降低;吖啶橙荧光染色结果显示瘢痕疙瘩成纤维细胞中酸性囊泡数量减少。2.100 nM雷帕霉素及5μM KU-0063794均能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移及胶原的合成,但对细胞凋亡无影响,并且双重mTORC1/2抑制剂KU-0063794抑制效应强于mTORC1抑制剂雷帕霉素。3.100 nM雷帕霉素和5μM KU-0063794均能诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞的自噬,而通过加入自噬抑制剂wortmannin预处理或转染si-ATG5的方法预先阻断细胞自噬后,不能改变由雷帕霉素或KU-0063794引起的对细胞增殖、迁移及胶原合成的抑制效应。结论:瘢痕疙瘩的发病过程中存在mTOR信号通路异常活化,并伴有细胞自噬受抑制的现象。mTOR抑制剂雷帕霉素和KU-0063794具有显著的抗瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成的生物学效应,具有潜在的治疗价值。自噬作为mTOR下游的关键信号,我们的研究发现,尽管mTOR抑制剂在抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成的同时还能诱导自噬,但自噬并未介导mTOR抑制剂的上述效应。