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目的:使用具有生肌、止血、散瘀功效的对药三七、白及,通过新的材料制作工艺,制备出三七/白及胶海绵用以促进糖尿病足溃疡创面的愈合。制备大鼠糖尿病溃疡模型并使用三七/白及胶海绵干预,研究该敷料对大鼠创面血管生成、愈合情况的影响,验证其促进创面愈合的机制是否与调控Wnt/β-catenin信号通路中的相关基因表达相关。 方法:1.采用振动式细胞级超微粉碎机制备微米化三七粉,水提醇沉法提取白及胶,通过冷冻干燥的方法制备三七/白及胶海绵(二代),并对该材料进行理化分析;2.SPF(Specefic Pathogen Free)级健康SD大鼠60只,雌雄各半,体重200±20g,适应性喂养1周,分出空白组正常喂养,其余高糖高脂饲料喂养4周,腹腔小剂量注射链脲佐菌素(STZ)30mg/kg制备糖尿病大鼠模型,大鼠尾静脉采血测得随机血糖≥16.7mmol/L(300mg/dL),出现多饮、多食、多尿及体重减轻的症状,视为糖尿病模型造模成功。采用磁压扎法制作大鼠背部全层皮肤慢性溃疡模型,溃疡造模成功后单笼饲养,防止互噬。随机分为三七/白及胶海绵组、明胶海绵组、凡士林纱布组、对照组四组,分别给予三七/白及胶海绵、明胶海绵、凡士林纱布、生理盐水纱布伤口处覆盖,无菌敷料、绷带及胶布固定,每隔1-2日换药。3.分别于大鼠糖尿病溃疡造模成功后3d、7d伤口取材,创缘组织HE染色方法检测伤口愈合的病理形态学变化;Real-Time PCR法检测创面组织的Wnt信号通路中β-连环素(β-catenin)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、R-脊椎蛋白3(Rspo3)mRNA的变化。 结果:1.三七/白及胶海绵的理化性能符合创面敷料的基本要求;2.糖尿病模型大鼠造模成功后,血糖水平≥16.7mmol/L,在之后随机检测中维持在较高水平,饮水量、进食量、排泄量增加,体重减轻。采用钕铁硼磁铁压扎法皮内植入皮外吸附可造成慢性溃疡创面;3.创面组织形态学观察中3d、7d各组创面愈合速率有显著差异(P<0.05),三七/白及胶海绵组愈合最快,其次为明胶海绵组、凡士林纱布组,无菌纱布组愈合最慢,并且材料治疗期间各组大鼠血糖水平无显著差异,HE染色观察三七/白及胶海绵组创面组织中血管生成、肉芽组织增生更好。创面组织3d、7d的Real-Time PCR结果显示,同期治疗各组大鼠创面组织中β-catenin mRNA表达以三七/白及胶海绵组最高,其次为明胶海绵组、凡士林纱布组、对照组,Rspo3mRNA表达三七材料组高于明胶海绵组,其次凡士林纱布组、对照组,组织中GSK-3βmRNA的表达水平对照组最高,其次凡士林纱布组、明胶海绵组,三七/白及胶海绵组较低。 结论:三七/白及胶海绵是安全的创面敷料载体,在糖尿病大鼠慢性溃疡中应用可以起到明显促进愈合作用,糖尿病慢性溃疡难愈的原因之一是Wnt/β-catenin通路相关基因的调节,三七/白及胶海绵材料通过对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、Rspo3mRNA上调,GSK-3βmRNA下调促进了糖尿病慢性溃疡的愈合。