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背景:卵巢癌在女性生殖系统恶性肿瘤中死亡率最高。目前的传统手术治疗和放射治疗的效果进展不大,总的生存率没有明显提高,而开发高效低毒的,多靶点多环节作用的抗癌药物已经成为现阶段治疗肿瘤的迫切需求和研究方向。去甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiaretic Acid ,NDGA)是从常青灌木Larrea tridentata,中提取的一种天然药物成分,在体内外的实验中能抑制多种肿瘤的生长,具有抗增生,抗肿瘤作用。有研究表明,NDGA可以抑制细胞增殖或诱导细胞凋亡[1],诱导肿瘤细胞分化[2]以及作用于细胞周期蛋白,阻滞细胞周期,抑制肿瘤细胞的生长增殖[3]。诺帝(Nordy)作为人工合成改良的NDGA化合物,与其天然成分相比,具有高效低毒等特点。经过我们之前的研究,发现诺帝同样可以抑制肿瘤细胞增殖,诱导凋亡和分化[4],但诺帝抑制肿瘤细胞增生的作用机制目前还不清楚,Nordy对于肿瘤细胞的作用是否为多机制多环节的有待进一步阐明。大多数不同组织类型的原发性上皮性卵巢癌细胞中Aurora-A呈现出异常高表达[5]。Aurora-A激酶作为丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员之一,是一种与中心体密切相关的基因,其过表达将导致中心体过度复制,中心体复制或分裂异常形成单级或多级纺锤体,从而引起染色体分离异常,形成异倍体。提示其过表达在卵巢癌的发病中可能起了重要作用。p53基因是一个与肿瘤的发生发展密切相关的基因,目前对该基因的研究较为充分。林宇庚[6]等,将野生型p53基因转染至卵巢癌细胞系SKOV3中,实验结果显示,野生型p53基因及其产物P53蛋白能减缓卵巢癌细胞的增生。提示野生型p53基因的表达增高可以抑制肿瘤细胞的生长。并且有大量实验证明,p53与Aurora-A激酶之间有着密切的联系[7~9]。目的:探讨Nordy对卵巢癌细胞系3AO及SKOV3细胞中心体复制相关激酶Aurora-A基因及蛋白表达的影响以及与野生型p53基因表达之间的关系,同时了解其对细胞增殖及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法:1、用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法,观察Nordy在体外对3AO及SKOV3肿瘤细胞增殖的影响;用流式细胞技术(flow cytometer,FCM),检测两株肿瘤细胞周期的变化情况。2、用RT-PCR及Western-blot方法分析25、50、100μmol/L Nordy作用于3AO及SKOV3肿瘤细胞72h后,两株肿瘤细胞中Aurora-A以及p53的表达及相关关系。3、统计学分析:实验数据采用均数±标准差( x±s)表示。用SPSS11.5软件对数据进行检验,多组比较采用方差分析,组间比较采用SNK-q检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、MTT实验结果显示,25、50、100μmol/L Nordy作用于3AO和SKOV3细胞72h后,抑制率分别为3AO(26.55%、48.43%、68.53%)SKOV3(22.15%、45.21%、66.67%),表现出良好的药物剂量依赖性和作用时间依赖性(P<0.05)。FCM检测结果显示,Nordy作用于两株卵巢癌72h后,G0/G1期细胞比例分别由81.36%,73.07%逐渐升高到86.96%,79.15%(P<0.05),S期细胞比例显著下降(P<0.05),G2/M期无明显改变(P>0.05),细胞周期表现出G0/G1期阻滞。2、RT-PCR结果显示,Nordy作用于3AO和SKOV3细胞72h后,随着Nordy作用浓度的增加,两株癌细胞中Aurora-A的mRNA表达均明显下降(P<0.05)。Western-blot结果显示,Nordy作用两株卵巢癌细胞72h后,随着Nordy作用浓度的增加,两株癌细胞中Aurora-A的蛋白表达均明显下降(P<0.05),而野生型p53表达上调(P<0.05)。3、通过对这两种细胞的比较发现,空白对照组以及各药物浓度组中,Aurora -A的mRNA在3AO和SKOV3之间的表达的差异没有统计学意义(P>0.05);Aurora–A和p53的蛋白表达的水平在3AO和SKOV3之间的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:1、Nordy可以抑制卵巢癌细胞系3AO和SKOV3细胞的增殖。Nordy可以有效地将两株肿瘤细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期。2、人卵巢癌细胞中Aurora-A的mRNA及蛋白均呈现高表达,Nordy可以下调3AO和SKOV3细胞中Aurora-A的表达,推测Nordy抑制3AO和SKOV3细胞的增殖的作用机制可能与Nordy上调p53的表达,p53抑制了Aurora-A激酶的活性有关。3、Nordy对这两株卵巢上皮性肿瘤3AO(粘液性)SKOV3(浆液性)的作用效果差别不明显,没有组织学上的差异。4、结果提示Nordy对3AO和SKOV3细胞增殖抑制可能是通过细胞周期阻滞以及抑制细胞分裂等多环节发挥作用。