亲代抚育的这种行为在哺乳动物中是非常常见的常见,可以让后代获得乳汁,这种物质富含一系列营养和非营养因素,对新生儿的生长和发育非常重要。而七彩神仙鱼在繁殖过程中也表现出一种不寻常的行为:在孵化一个月后,自由游动的鱼苗会啄食父母的皮肤粘液来生长发育。这种行为与哺乳动物的哺乳行为非常相似。然而,人们对七彩神仙鱼分泌“乳汁”的机制和相关基因知之甚少。因此,在亲代抚育期和非亲代抚育期,分别取抚育期和非抚育期雌性七彩神仙鱼的皮肤组织和脑组织进行转录组测序分析。通过分析脑组织转录组数据,亲代抚育期和非亲代抚育期相比有86个差异表达基因,包括71个表达量增加的基因和15个表达量减少的基因。上调基因包括ednrb、laptm、foxb、otx2和nrif2等,下调基因包括prkcd、h1-5、sox1和hbe。通过功能富集分析获得20个代谢途径,包括炎性介质管理的渠道,血管平滑肌收缩,神经营养信号通路等通路。通过对七彩神仙鱼皮肤组织转录组分析,亲本抚育期与非亲本抚育期铁饼进行比较共获得228个差异表达基因,其中表达量增加的基因有126个,表达量减少的基因102个。上调基因包括mrc、itga11和ptprj等,下调基因包括junb、dpp3、casp3、ppid、aloxe3、hbe和gale等。通过KEGG通路分析,发现花生四烯酸代谢、粘附、凋亡、甾体生物合成、结核、P53信号通路和5-羟色胺能突触7条显著富集通路。为探讨七彩神仙鱼脑组织中otx2基因在亲代抚育过程中的作用,采用RTPCR法克隆得到了七彩神仙鱼otx2基因,该基因的c DNA序列长度为876bp,编码后的氨基酸有290个,预测分子量为31.7715Ka,理论等电点为9.40。运用SMART、Swiss-model和MEGA软件对基因的结构及物种进化关系进行分析。根据氨基酸序列预测,otx2基因具有otx家族的保守结构域,在进化关系上与尼罗罗非鱼和白边锯鳞鱼亲缘关系相近,根据同源性分析发现,其氨基酸序列与尼罗罗非鱼、长（?）鱼、西瓜刨、牙鲆和白边锯鳞鱼的同源性都在75%以上。根据空间表达实验荧光定量PCR分析显示,otx2基因在雌性七彩神仙鱼大脑、肝脏、心脏、肾脏等组织中都有表达,并且在脑中的表达是显著高表达。原位杂交结果显示,otx2基因在七彩神仙鱼中脑的小球周灰质带、纵枕、顶盖室等区域均有表达。为探讨皮肤组织中mrc基因在七彩神仙鱼亲代抚育过程中的作用,采用RTPCR法克隆得到了七彩神仙鱼mrc基因,mrc的c DNA序列长度为876bp,共编码291个氨基酸,预测分子量为33.4404Ka,理论等电点为5.39。在进化关系上与和脊椎动物斑马拟丽鱼、尼罗罗非鱼、美妊丽鱼、布氏新亮丽鲷、乌鳢、底鱂和南亚野鲮mrc蛋白的多重序列比较。得到七彩神仙鱼mrc氨基酸序列的与其他动物的mrc氨基酸序列相似性都低于75%。荧光定量PCR结果显示,mrc基因的表达分布在雌性七彩神仙鱼头肾、皮肤、心脏、肝脏、等组织中,并且在头肾和皮肤中的表达是显著高表达。原位杂交结果表明,mrc基因表达在七彩神仙鱼皮肤表皮粘液层中。综上,在本实验条件下,我们对七彩神仙鱼亲代抚育行为分泌相关基因和调控机制进行初步探究,为七彩神仙鱼亲代抚育调控机制提供基础资料。