【摘 要】
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目的:比较富白富血小板纤维蛋白（Leukocyte and platelet-rich fibrin,L-PRF）和改良型富血小板纤维蛋白（Advanced platelet-rich fibrin,A-PRF）两者电镜下纤维蛋白结构、对成纤维细胞活性的影响以及生长因子释放能力,并观察对裸鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合作用的影响。方法:1.两种富血小板纤维蛋白的制备:取40名志愿者静脉血各10ml,分别以4
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目的:比较富白富血小板纤维蛋白（Leukocyte and platelet-rich fibrin,L-PRF）和改良型富血小板纤维蛋白（Advanced platelet-rich fibrin,A-PRF）两者电镜下纤维蛋白结构、对成纤维细胞活性的影响以及生长因子释放能力,并观察对裸鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合作用的影响。方法:1.两种富血小板纤维蛋白的制备:取40名志愿者静脉血各10ml,分别以400g 10 min、125g 14 min制备L-PRF、A-PRF。取中间淡黄色凝胶层,用无菌纱布挤压吸附血清,并塑形得到所需PRF膜片。2.生物学性能比较:将PRF膜片置于DMED/F12培养基内,分别收集第1h、6h、1D、3D、7D、14D的培养基,采用酶联免疫吸附剂测定法测量三种目的生长因子:血小板源性生长因子AB（Platelet-derived growth factor AB,PDGF-AB）、血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）的不同时间点及累计浓度。于扫描电镜作用下可观察与比较A-PRF和L-PRF的细胞形态变化及纤维蛋白立体网状结构。3.富血小板纤维蛋白条件培养基在体外对细胞活性的影响:MTT比色法比较L-PRF、A-PRF条件培养基对L929成纤维细胞的增殖作用;划痕实验比较两者对细胞的迁移作用。4.富血小板纤维蛋白对深Ⅱ度创面治疗效果的观察:准备36只SPF级健康成年雄性裸鼠（8w,BALB/c-nu,20～23g）,随机分组,共3组,每组12只裸鼠,自由喂养1周,于大腿部皮肤制作直径为1.0cm的圆形深Ⅱ度创面后给予不同治疗方案,将所制得L-PRF、A-PRF膜片覆盖创面,分为空白对照组、L-PRF治疗组、A-PRF治疗组。观察创面并拍照记录第4、7、14、21天烧伤皮肤组织愈合情况并测量创面面积变化,取皮肤创面组织行组织病理学分析包括苏木精-伊红染色、马松三色染色及CD31免疫组化染色。结果:通过不同离心条件成功获得两种PRF凝胶后制备膜片后行一系列相关检测。扫描电镜结果示A-PRF由轻聚合较纤细的纤维蛋白束组成,所构成纤维蛋白网相比L-PRF更为疏松。ELISA酶联实验结果示A-PRF的三种目标生长因子各时间点及总体释放量均高于L-PRF。此外,A-PRF的条件培养中的L929成纤维细胞表现出较强的细胞活性,可促进细胞体外的生长增殖和迁移。在裸鼠深Ⅱ度烧伤动物实验中,A-PRF治疗组创面愈合速度相比空白对照组、L-PRF组更快,创面面积缩小明显,且愈合质量更优。取皮肤创面组织行HE染色结果示A-PRF治疗组光镜下观察炎性细胞数量递减最快,且伴随皮肤附属器出现。Masson染色结果示A-PRF组治疗后创面胶原排列更为有序,无过度沉积现象。免疫组化CD31抗体染色结果示,A-PRF组创面组织中CD31表达水平高于另两组,说明血管新生能力更为显著。结论:采用125g 14 min离心条件所研究制备的A-PRF疏松的网状结构利于细胞、血小板的粘附与储存,使其释放过程缓慢而又持续,可为组织平稳提供生长因子,促使表皮细胞迁移增殖、胶原有序排列、血管新生及创面再上皮化,更有效加快深Ⅱ度烧伤创面的愈合。
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