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禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)引发的小麦赤霉病是一种世界性真菌病害,不仅造成了严重的经济损失,而且由镰刀菌产生的真菌毒素极大的危害了人畜健康。由于天然抗性资源的匮乏和发病机制的复杂性使抗赤霉病转基因育种工作进展缓慢。近年来,RNA干扰技术成为植物抗病研究工作的新手段。本研究以小麦转化载体为骨架,构建了小麦农杆菌和基因枪RNAi载体,利用双启动子启动基因的转录,提高了基因转录的效率;将禾谷镰刀菌关键基因的RNAi片段构建到小麦表达载体中,加强了基因沉默效果,为下一步小麦遗传转化提供了材料。主要研究结果如下:1.以实验室已有的双边界农杆菌表达载体为基础,构建了含双启动子的小麦双边界农杆菌RNAi载体,双启动子包含ubi、cmps、lem2、lem1和Ca MV 35S的两两组合,增强了外源基因的表达,其筛选标记基因均为UPMI,筛选标记的启动子为ubi、cmps或改造后的cmpsΩ。同时构建了含双启动子的小麦单边界农杆菌RNAi载体,双启动子为ubi、cmps,以PMI为筛选标记基因,筛选标记启动子为ubi。2.以单基因单片段、单基因双片段、多基因双片段或多基因多片段的方式构建形成RNA干扰结构,用于小麦农杆菌RNAi载体。3.构建了单启动子的双RNA干扰片段的小麦基因枪表达载体和农杆菌表达载体。双片段包含禾谷镰刀菌几丁质合成酶基因Chs7的第3、4个片段,蛋白激酶C基因Pkc的第3个片段的两两组合。4.以实验室已有的双启动子拟南芥载体为基础,构建了含有RNA干扰片段gls As3、gls As6、chs3b As1的表达载体,用于转化拟南芥。5.将已构建的抗赤霉病RNA干扰载体转化根癌农杆菌GV3101,获得阳性克隆,用于下一步的小麦遗传转化。