【摘 要】
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背景:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界上最常见的恶性肝脏疾病,其中半数以上的新发病例和死亡病例在中国,严重影响我国人民的健康。越来越多证据显示,血小板在维持肝脏稳态以及多种肝脏疾病的病理生理过程中起关键作用。血小板不仅参与止血,活化的血小板还能产生细胞因子以及通过其负责的信号通路与肝细胞及肿瘤微环境相互作用,促进肿瘤的发生发展。这些研究提示,血小板在肝癌发
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背景:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界上最常见的恶性肝脏疾病,其中半数以上的新发病例和死亡病例在中国,严重影响我国人民的健康。越来越多证据显示,血小板在维持肝脏稳态以及多种肝脏疾病的病理生理过程中起关键作用。血小板不仅参与止血,活化的血小板还能产生细胞因子以及通过其负责的信号通路与肝细胞及肿瘤微环境相互作用,促进肿瘤的发生发展。这些研究提示,血小板在肝癌发生发展中可能有着不可忽视的作用。血小板是外周血中丰富的细胞类型,容易在血液检测中分离和计数,通过监测血小板计数预测肝癌患者的预后具有很重要的临床意义。但是血小板在肝癌发生发展中的作用还未阐明。因此,深入研究血小板及其成分在肝癌的发生发展及炎性肿瘤微环境中的作用意义重大,将为寻找有效阻断血小板-肿瘤细胞相互作用且不影响血小板正常生理功能的靶点提供理论基础。目的:通过观察完整血小板和破碎血小板对HCC细胞Hep G2及SMMC-7721增殖、凋亡、侵袭和表达炎性因子的影响,探讨血小板在肝癌的发生发展及炎性肿瘤微环境中的作用。方法:1.建立PLT/PL/PRP/PPP与肝癌细胞共培养模型:收集正常人EDTA-K2抗凝血液,分离血小板（PLT）,制备富血小板血浆（PRP）、乏血小板血浆（PPP）和血小板裂解液（PL）;使用含有不同血小板数量的DMEM培养基培养肝癌细胞Hep G2及SMMC-7721。2.检测血小板对HCC生物学功能的影响:通过CCK-8检测血小板对肝癌Hep G2细胞和SMMC7721细胞增殖能力的影响;通过流式细胞术检测血小板对肝癌Hep G2细胞和SMMC7721细胞凋亡能力的影响;通过Transwell检测血小板对肝癌Hep G2细胞和SMMC7721细胞侵袭能力的影响;通过RT-PCR检测检测血小板对肝癌Hep G2细胞和SMMC7721细胞EMT标志物（E-cadherin、Fibranectin、N-cadherin、Snail、Vimentin、ZEB-1和β-catenin）表达的影响。3.检测血小板对HCC炎症肿瘤微环境的影响:通过RT-PCR检测血小板对肝癌Hep G2细胞和SMMC7721细胞分泌炎性细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、i NOS、）和趋化因子（CCL2、CCL5）的影响。结果:1.血小板及其裂解成分能够促进HCC细胞Hep G2和SMMC7721的增殖（P＜0.05）。2.血小板及其裂解成分能够不同程度地抑制HCC细胞Hep G2和SMMC7721的凋亡（PRP和PPP早期凋亡P＜0.05、晚期凋亡影响不显著;FBS和FBS+PLT比较P＜0.05）。3.血小板及其裂解成分能够促进Hep G2细胞和SMMC7721细胞的侵袭（P＜0.05）。4.血小板及其裂解成分能够影响肝癌细胞Hep G2和SMMC7721表达间质细胞标志物（Fibranectin、N-cadherin、Snail、Vimentin、ZEB1、β-catentin）,明显促进HCC细胞的EMT转化（P＜0.05）。5.血小板及其裂解成分能够不同程度地影响Hep G2细胞和SMMC7721细胞表达炎性细胞因子（IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、i NOS）和趋化因子（CCL2、CCL5）,促进HCC炎性微环境的形成（P＜0.05）。结论血小板在HCC进展中具有重要作用,能够显著促进HCC的发生发展及炎性肿瘤微环境的形成。
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