研究背景与目的：甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)，又称甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)，是一种钙离子依赖的(C型)血清凝集素，在防御抵抗多种病原微生物的天然免疫中起着重要的作用，对6个月到2岁的婴幼儿尤其重要。 MBL是一个由若干个相同的亚单位组成的寡聚体分子，每条肽链的C端是一凝集素结构域(碳水化合物识别结构域)，近N端是一胶原样区。这两个结构区与MBL的生物学功能密切相关。其凝集素结构域可以与某些特定的糖配体结合，尤其是与病原微生物表面的糖链结合后，可通过胶原样区激活MBL相关丝氨酸蛋白酶，进而激活补体系统，这条途径称为凝集素途径。MBL也可直接与吞噬细胞表面的胶原凝素受体结合，发挥调理吞噬功能或引起其它的免疫反应。 正常情况下MBL的血清浓度很低，1.5mg/L左右，但在感染的早期可升高2-3倍。因基因突变而导致的MBL表达水平降低或结构异常，与免疫功能处于不成熟阶段的儿童对感染的易感性增强密切相关。 浙江大学硕土学位论文 本研究旨在用亲和层析法分离纯化出MBL分子，并测定其与单糖配体以及与儿童临床上常见细菌的结合活性，探讨其在儿童天然免疫中的作用。方法：将甘露聚糖与漠化氰活化的 SSph。Se 4B偶联，制成亲和柱基质一甘露聚糖Sopharose 4B。将羊血清或人血浆过亲和柱，在钙离子存在的条件下，MBL分子可与柱上的甘露聚糖结合。用EDTA通过螫合钙离子，从亲和柱上洗脱MBL，从而分离纯化出MBL。用还原性10％SDS－PAGE测定羊及人MBL分子单体的分子量。羊血清MBL经胶原酶消化后，将其产物行还原性 10％SDS－PAGE，观察 MBL分子量的变化。用酶联凝集素试验测定羊血清MBL与单糖配体及与常见细菌的结合活性。结果：①MBL的分离纯化：羊血清与人血浆分别经亲和层析后，得到纯化的 MBL分子。在还原条件下行SDS－PAGE，羊血清MBL在29kD和 33kD及更高分子量处有蛋白质条带；人血浆N旧L在30kD及90 kDkD 处有蛋白质条带； ②MBL分子胶原样结构的鉴定：羊血清MBL分子被胶原酶消化后， 在还原性SDS－PAGE上显示22．4kD及ZI．6kD处有蛋白质条带； ③羊血清MBL与单糖配体的结合活性：羊血清MBL分子对各单糖配 体的结合有一定的选择性，从大到小依次为：N乙酞氨基葡萄糖＞卜 岩藻糖＞＊－氨基葡萄糖＞N－乙酚氨基半乳糖； ④羊血清MBL与常见细菌的结合活性：羊血清MBL对不同的细菌有 不同的结合力：对解鸟氨酸克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌有很强的结 合力；对溶血性葡萄球菌、阴沟肠杆菌、表皮葡萄球菌的结合力相 对较弱；对肺炎克雷伯氏菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌的不 同菌株结合力差异较大。结论：用甘露聚糖石Cpharose 4B亲和柱行亲和层析能从哺乳动物血清（血 ．2． 浙江大学硕士学位论文浆）中分离纯化出有活性的MBL分子，人血浆MBL单体的分子量是30kD，羊血清MBL单体有两种，分子量分别为29kD和33kD。羊血清MBL分子与其它哺乳动物的MBL分子一样，也具有胶原样结构域。羊血清MBL对各种单糖的结合有不同的选择性，其选择性与人血浆MBL类似。羊血清MBL对不同的细菌有不同的结合力，对革兰氏阴性菌的结合力相对较阳性菌强。