【摘 要】
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目的:探讨姜黄素(curcumin,CUR)诱导人神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)细胞系自噬调控研究及恶性生物学影响。方法:(1)体外培养SK-N-SH细胞系,待细胞处于对数期,加入不同浓度的 CUR(5μM、10μM、15μM、20μM、25μM、30μM、35μM);SK-N-SH 细胞培养 24h 后,用 CCK-8 法检测 CUR 对 SK-N-SH细胞增殖影响。(2)将实
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目的:探讨姜黄素(curcumin,CUR)诱导人神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)细胞系自噬调控研究及恶性生物学影响。方法:(1)体外培养SK-N-SH细胞系,待细胞处于对数期,加入不同浓度的 CUR(5μM、10μM、15μM、20μM、25μM、30μM、35μM);SK-N-SH 细胞培养 24h 后,用 CCK-8 法检测 CUR 对 SK-N-SH细胞增殖影响。(2)将实验分为五组:对照组(0.1%DMSO)、CUR组(15μM)、CUR 组(25μM)、联用组 CUR(25μM)+3MA(5mM)、3MA组(5mM)。利用RT-PCR测定LC3、Beclin1 mRNA表达情况;采用WB测定 LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR 蛋白表达;分别利用细胞划痕与Transwell实验检测CUR对SK-N-SH细胞转移、侵袭性影响。结果:(1)CCK-8检测显示:当药物5μM、10μM时,CUR在对SK-N-SH细胞增殖无明显影响,超过一定药物浓度后,随着浓度增高,对细胞抑制越明显,计算出IC50为33.84μM。(2)RT-PCR与WB结果显示:CUR组与对照组相比LC3、Beclin1表达明显升高,在一定范围内,药物浓度越高表达升高越明显(P<0.05);加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(CUR+3MA 组)与 CUR组相比,LC3Ⅱ、Beclin1 表达适当下调(P<0.05)。3MA组与对照组相比LC3Ⅱ、Beclin1均表达下调,但无统计学意义(P>0.05)。CUR 组与对照组相比 p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt,p-mTOR/mTOR蛋白表达均下降(P<0.05);CUR+3MA组与CUR组比较,三者蛋白表达适当升高(P<0.05);CUR+3MA组与对照组相比,三者表达下降(P<0.05)。(3)细胞划痕实验显示:CUR组与对照组相比,明显细胞迁移距离更小,药物浓度越高作用越明显;CUR+3MA组与CUR组相比,细胞迁移距离增大。(4)Transwell实验结果显示:CUR与CUR+3MA处理细胞后,细胞穿过下孔细胞数量明显减少(P<0.05);CUR组穿出细胞数量更少。单用3MA处理细胞后与对照组相比,细胞穿出数量减少,但无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)CUR抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖,且存在浓度依赖性。(2)CUR诱导SK-N-SH细胞自噬,可能通过抑制PI3K-Akt-mTOR信号轴发生的。(3)CUR能抑制SK-N-SH细胞发生迁移与侵袭,加入自噬抑制剂3MA后,抑制作用减弱。
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