目的:1.建立一种能够同时定量微量随机中段尿液中多种氨基酸和有机酸的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）新方法。其中氨基酸包括:同型半胱氨酸（L-Homocysteine,HCY）、蛋氨酸（L-Methionine,MET）、胱硫醚（L-Cystathionine,CYSTA）、丙氨酸（L-Alanine,ALA）、精氨酸（L-Arginine,ARG）、瓜氨酸（L-Citrulline,CIT）、甘氨酸（Glycine,GLY）、组氨酸（L-Histidine,HIS）、异亮氨酸（L-Isoleucine,ILE）、亮氨酸（L-Leucine,LEU）、苯丙氨酸（L-Phenylalanine,PHE）、脯氨酸（L-Proline,PRO）、丝氨酸（L-Serine,SER）、苏氨酸（L-Threonine,THR）、色氨酸（L-Tryptophan,TRP）、酪氨酸（L-Tyrosine,TYR）、缬氨酸（L-Valine,VAL）;有机酸包括:甲基丙二酸（Methylmalonic acid,MMA）和甲基枸橼酸（Methylcitric acid,MCA）。2.建立北京地区1～7岁儿童随机中段尿液中目标氨基酸及有机酸的生物参考区间。方法:1.样品前处理以及LC-MS/MS分析条件和参数的调试:10μL尿液样本经乙腈沉淀蛋白后使用饱和盐酸正丁醇进行衍生化。衍生后的样本经ACE Excel 2 AQ（50×2.1mm,2μm）色谱柱分离,采用电喷雾离子源（ESI）,在正离子扫描和多反应监测（MRM）模式下检测,以标准品和人工尿液配制系列标准曲线结合稳定同位素内标法进行定量,建立定量尿液中多种氨基酸和有机酸的LC-MS/MS新方法。2.方法学确证:对添加了低、中、高不同浓度标准品的人工尿液样品进行连续3个批次的检测,每个浓度水平每批次设置5个平行样本,考察方法的准确度和精密度。同时参照现有指南在选择性、回收率、基质效应、稳定性等方面完成系统方法学确证。3.方法实用性和可靠性的验证:检测28例健康儿童及3例甲基丙二酸血症cbl C型（甲基丙二酸血症合并同型半胱氨酸血症）患儿尿液中目标待测物的水平并通过肌酐浓度进行校正,进一步验证方法的实用性和可靠性。4.建立参考区间:收集388例北京地区1～7岁健康儿童尿液,使用新建方法检测其尿液中目标氨基酸及有机酸水平,并使用肌酐对其水平进行校正。数据统计分析和参考区间计算使用Excel 2016和SPSS 26.0软件进行分析,首先采用Dixon方法初步剔除离群值,其次按照生理发育阶段初步进行分组,并使用Harris＆Boyd方法对分组进行检验,确认分组后使用Tukey方法进一步剔除每一组的离群值,最终使用非参数方法计算每个组别95%参考区间及使用Bootstrap计算上下限的90%置信区间。另收集40例同一年龄阶段健康儿童尿液进行检测,用于参考区间的验证。结果:1.本研究建立的LC-MS/MS方法能同时定量尿液中多种氨基酸和有机酸水平,分析时间为8分钟,选择性强。准确度良好（RE%均＜±15%）,批内、批间精密度RSD均＜15%,19种目标待测物定量下限范围为0.01～1.00μmol/L,标准曲线线性良好,R~2均＞0.990。除ARG外,其余待测物未见明显基质效应,加标回收率范围为80.20～114.97%,室温8h和3个冻融循环稳定性良好。2.28例健康儿童尿液中待测物检测值与既往研究相一致,3例甲基丙二酸血症cbl C型患儿尿液中MMA、MCA和HCY水平高于健康儿童中位数水平3.99～93.52倍。3.北京地区1～7岁儿童尿液中多数氨基酸和有机酸参考区间与国外儿童参考区间基本一致,其中HCY、MMA和TYR参考区间上限稍高于国外参考区间。分组检验表明1～7岁儿童尿液中氨基酸和有机酸在性别上无差异,幼儿期（1～3岁）尿液中ALA、LEU、MET、PHE、PRO、SER、TRP、TYR、VAL、MCA高于学龄前期（＞3～7岁）,需分组建立参考区间,其余氨基酸及有机酸在幼儿期和学龄前期不存在差异。结论:本研究建立了随机中段尿液中同时定量17种氨基酸（HCY、MET、CYSTA、ALA、ARG、CIT、GLY、HIS、ILE、LEU、PHE、PRO、SER、THR、TRP、TYR、VAL）和2种有机酸（MMA和MCA）的LC-MS/MS新方法,该方法样本需求量小,分析时间短,灵敏度高,特异性强,能准确反映儿童尿液中目标待测物水平,为氨基酸代谢紊乱的相关研究提供有用工具。通过本方法建立了1～7岁北京地区健康儿童尿液氨基酸和有机酸参考区间,为临床诊疗及研究提供依据。