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目的:1.通过二乙基亚硝胺(Dietltylmitrosainine,DENA)诱导大鼠肝癌癌前病变模型,观察其对于制造肝癌癌前病变的可行性及可靠性;2.通过DENA诱导大鼠肝癌癌前病变模型,研究益脾养肝方在肝癌癌前病变过程中对肝功能的影响和其对于炎症微环境形成的作用机制;方法:SPF级雄性Wister大鼠80只,适应性喂养1周后进入实验,随机分为空白组、模型组、益脾养肝方小剂量组、益脾养肝方大剂量组,每组20只;实验开始以DENA0.5ml/100g腹腔注射,2次/周(即1次/84h),50mg/kg/周,连续给药至16周,制作肝癌前病变模型;造模同时,益脾养肝方小剂量组以0.5g/ml,10ml/kg的益脾养肝方灌胃,1次/d;大剂量组以1.0g/ml,10ml/kg的益脾养肝方灌胃,1次/d,连续给药至16周;于第16周灌胃24h后处死大鼠,处死大鼠前称重,心脏采血,取出肝脏、脾脏并称重(单位:g),同时计算大鼠生存率、肝癌发生率、肝脏和脾脏指数;肝功能指标AST、ALT、GGT、ALP、TBIL的变化;苏木精-伊红染色(HE染色)观察肝脏病理改变;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定外周血中炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肝组织中Toll样受体4(TLR4)、核因子ΚB(NF-ΚB)表达水平的变化。结果:1.益脾养肝方对DENA诱导的肝癌癌前病变大鼠模型的生存率具有明显的提高作用,模型组和益脾养肝方小剂量组、大剂量的生存率分别为85%、90%、95%,各组间比较无统计学意义(P>0.05);同时,可降低各组肝癌的发生率,其发生率分别为10%、5%、0%,各组间比较无统计学意义(P>0.05);对于肝脏指数和脾脏指数均有明显降低作用(P<0.05),且从造模开始各组大鼠体重均呈增加,但增加幅度以空白组最高,其后依次为益脾养肝方大剂量组、小剂量组、模型组;直到取材前益脾养肝方大剂量组大鼠体重与模型组比较体重并未见大幅度的差异性变化(P>0.05)。2.益脾养肝方对DENA诱导的肝癌癌前病变大鼠肝功能具有明显的改善作用:与空白组比较,模型组肝脏功能明显下降,肝功指标ALT、AST、GGT、ALP、TBIL显著升高(P<0.01);益脾养肝方小剂量组和模型组比较ALT、AST、GGT、TBIL下降显著(P<0.05),ALP改善不显著(P>0.05);益脾养肝方大剂量组和模型组比较ALT、AST、GGT、ALP、TBIL数值均降低(P<0.01);益脾养肝方组内比较ALT、AST、GGT、ALP、TBIL变化同样存在显著性(P<0.01),故而认为益脾养肝方大剂量组较益脾养肝方小剂量组疗效更显著。3.与空白组比较,模型组血清和肝脏组织中的炎症因子IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB的表达水平表现出显著上升(P<0.01);益脾养肝方小剂量组和模型组炎症因子表达水平对比,TNF-α、TLR4、NF-κB均出现了不同程度的下调(P<0.05、P<0.05、P<0.01),而对于IL-6的表达并未表现出显著性调节作用(P>0.05);益脾养肝方大剂量组和模型组炎症因子表达水平对比IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB均出现不同程度的下调(P<0.01),且益脾养肝方组内比较,益脾养肝方大剂量组IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB的变化水平更显著(P<0.01)。结论:1.以DENA诱导肝癌癌前病变大鼠模型操作简便方法简便,死亡率低,癌变率低,可作为良好的诱法肝癌癌前病变的化学试剂;2.益脾养肝方可明显改善DENA诱发肝癌癌前病变模型大鼠的肝功能,具有保肝作用;3.益脾养肝方可通过降低肝癌癌前病变大鼠肝脏中炎性因子的水平来抑制炎症微环境的形成;4.益脾养肝方对肝癌前病变的形成、肝癌的进展方面具有重要作用,有望成为中医药预防肝癌的重要手段。