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超氧化物歧化酶(SOD)是一种含铜、锰、铁等金属离子的酶,广泛存在于生物内,可催化超氧阴离子自由基(O2-)发生歧化反应,在防止O2-的毒性方面具有重要意义。大量研究表明,在衰老、炎症、肿瘤、放射病、自身免疫性疾病以及某些传染病中,超氧化物歧化酶的活性和含量的改变表现出相似的规律,即随疾病的发生、发展,人体内超氧化物歧化酶的活性及含量也逐步降低。随着疾病好转,超氧化物歧化酶的活性也逐步回到正常水平。因此,SOD活性低下可以看作是某些疾病的特征之一,通过使用外源性的SOD达到防病治病的目的已成为大家所关注的问题。然而,SOD是生物大分子,其分子量大,半衰期短,不易透过细胞膜,临床应用易引起机体排异反应,故其药用价值受到了极大的限制。为此,生物化学界的科研人员用化学手段合成与表征具有相关结构铜,锰,铁甚至钴等金属离子的小分子配合物来模拟SOD,以克服SOD的缺点,并使模拟化合物的小分子配合物能最终运用于临床。 为了检测SOD模拟化合物[Mn(EDTB)(AC)]和(Cu2C21N14H27Cl13)的抗癌活性,本实验以口腔颊黏膜细胞、肝癌细胞SSMC-7721细胞株、胎儿肝细胞L-02细胞株为材料,开展以下实验:①彗星实验——MSOD对口腔颊黏膜细胞DNA的影响,寻找此种MSOD对正常细胞的安全剂量范围;②绘制生长曲线,反映不同浓度MSOD对细胞生长的影响;③MTT比色分析,检测两种模拟化合物对SSMC-7721细胞的增殖抑制作用;④彗星实验、基因组DNA的提取和凝胶电泳实验,研究SOD模拟化合物对肝癌细胞SSMC-7721细胞株和胎儿肝细胞L-02细胞株DNA的影响;⑤流式细胞仪检测MSOD对细胞周期分布的影响;⑥细胞内源SOD活力及蛋白质含量的检测,探讨细胞内外环境SOD活力、蛋白含量变化。实验结果发现:①浓度小于100 μg/ml时,没有发现Cu2C21N14H27Cl13对⑧羔款氯口腔颊勃膜细胞DNA有损伤作用;②绘制的生长曲线和MTT比色分析发现:两种MSOD对SSMC一7721细胞生长有抑制作用,并且这种抑制作用随着时间的延长和浓度的增加逐渐增大,而对L一02人胎肝细胞活性的影响很小;③基因组DNA的提取和凝胶电泳实验表明:SSMC一7721肝癌细胞受两种MSOD影响,细胞DNA发生规律性断裂,1%琼脂糖凝胶电泳,出现四条带,而对照组DNA电泳呈单一带型。对L一02人胎肝细胞DNA影响,无论是对照组还是加MSOD组,DNA电泳呈单一带型。单细胞凝胶电泳技术一彗星实验检测也表明:发现MSOD对SSMC一7721肝癌细胞DNA的明显损伤作用;④流式细胞仪测量的结果:SSMC一7721肝癌细经过不同浓度的模拟化合物「Mn(ED TB)(AC)〕处理12小时后,GO,G,期细胞明显高于对照组,S期细胞明显减少;⑤经过MSOD处理的肝癌细胞SSMC一7721,离心后发现上清培养液中SOD活力下降,而细胞内的SOD的活力上升。上清培养基蛋白质的总含量出现下降,细胞内的蛋白质的总含量也出现下降。 上述实验结果表明:发现外源抗氧化剂SOD模拟化合物,能改变肝癌细胞SSMC一7721内氧化还原水平,阻止DNA复制,抑制癌细胞的增殖,为SOD模拟化合物开发成为一种治疗肿瘤的新药提供重要的科学依据。