目的：研究糖尿病胃平滑肌细胞的凋亡以及线粒体膜电位的改变，探讨糖尿病胃平滑肌细胞的线粒体异常与细胞凋亡的关系，阐明糖尿病胃轻瘫的病理机制，为新药的设计和探索新的治疗方法提供理论与实验依据。 方法： 1．动物分组及造模：健康纯系雄性SD大鼠60只，随机分为对照组(n=20)和模型组(糖尿病大鼠，n=20)。模型组：用0.1mmol/L柠檬酸缓冲液配制的2％链脲佐菌素(STZ)60mg/Kg一次性腹腔内注射，3日后禁食不禁水6h，采尾血测空腹血糖，以血糖持续一周≥16.9mmol/L为糖尿病模型造模成功；对照组；0.1mmol/L柠檬酸缓冲液2ml/Kg一次性腹腔内注射。两组均给予标准鼠饲料喂养。造模后监测并记录两组大鼠的一般指标，包括精神状况、活动状况、皮毛色泽、进食量、饮水量、尿量等，每周测一次体重。造模后第3天、1周、4周、8周检测血糖。不同实验取材前再检测大鼠空腹血糖1次，并记录大鼠体重。2.观测两组大鼠胃肠动力学指标：胃排空和小肠传输速率。造模10周后，两组大鼠(n=10)于实验前禁食不禁水24h，将1mg/ml的美蓝溶液0.4ml经口灌胃，30min后脱颈椎处死大鼠，迅速打开腹腔取全胃，沿胃大弯侧剪开，将胃内残留物用4ml的生理盐水冲洗并收集冲洗液，离心取上清液，用722分光光度计在640nm波长检测吸光度值(OD)，测两组反映胃排空的胃内色素残留率；取全胃后迅速游离小肠，测量小肠被美蓝染成蓝色的末端至幽门的距离(a)和小肠总长度(A)即幽门至回盲瓣的距离，计算小肠传输速率。3.透射电镜观察胃平滑肌形态学变化：造模10周后，实验前禁食不禁水24h，直接脱颈椎处死大鼠，迅速打开腹腔取全霄，沿胃大弯侧剪开，将胃内残留物用生理盐水冲洗干净，分别取对照组大鼠和模型组大鼠部分胃体部组织用3％的冰冷戊二醛固定后，经二次固定、脱水、渗透、包埋、超薄切片、染色后观察胃平滑肌细胞超微结构。4．胃平滑肌细胞凋亡检测：两组大鼠(n=10)实验前禁食不禁水24h，直接脱颈椎处死大鼠，在相对无菌的条件下，迅速打开腹腔取全胃，沿胃大弯侧剪开，将胃内残留物用无菌的生理盐水冲洗干净后，移入无菌操作台，剥去浆膜和刮除内膜，用机械法与酶消化法分离胃平滑肌细胞，并测定细胞活力，将胃平滑肌的细胞悬液密度调整至1×106/ml，备用。取活力较好的单细胞Annexin V-FITC和PI双染，流式细胞仪检测模型组和对照组大鼠胃平滑肌细胞的凋亡情况。 5．胃平滑肌细胞的线粒体膜电位检测：取活力较好的单细胞JC-1染色，流式细胞仪检测模型组和对照组大鼠胃平滑肌细胞线粒体膜电位。 结果： 1.两组大鼠的一般情况：对照组大鼠一般状况良好，皮毛光滑，活动正常，进食量、饮水量、尿量、大便量及性状无明显改变，体重逐渐增加；模型组大鼠于造模后第3天开始持续出现多饮、多食、多尿，体重未见增长；4-5周部分大鼠食量开始减少，仍有多饮、多尿外，稀大便与干结便均可见；10周时绝大部分大鼠异常消瘦、精神倦怠、反应迟钝、皮毛疏松无光泽、背部的毛发部分脱落，大便干稀不等，少数极度衰竭。模型组大鼠的平均体重(207.50±61.29g)明显低于对照组(463.00±37.21g)，P<0.01。最终纳入实验的糖尿病大鼠20只，正常对照组大鼠20只。 2．模型组大鼠平均血糖浓度(30.44±1.73mmol/L)显著高于对照组大鼠(5.65±0.87 mmol/L)，P<0.01。 3．以胃内色素残留率反映胃排空情况，模型组大鼠胃内色素残留率(53.77％±4.65％)明显高于对照组大鼠(40.48％±2.81％)，P<0.01。 4. 模型组大鼠小肠传输速率(32.80％±3.25％)显著慢于对照组大鼠(51.90％±2.38％)，P<0.01。 5．胃平滑肌细胞超微结构如下：正常细胞多呈梭形，细胞核规则，呈长椭圆形，核膜相对平滑，褶皱少而浅，异染色质分布均匀，胞质内密斑、密体明显，肌丝清晰可见，线粒体较多。模型组大鼠胃平滑肌形态学改变明显：细胞变小，部分细胞胞膜凹陷明显，细胞核不规则、核膜皱缩明显，染色质呈致密块状，深染、边聚，密体、肌丝减少，线粒体肿胀和内质网扩张。 6. 机械法与酶消化法联合获得足量的胃平滑肌单细胞悬液，台盼蓝染色细胞活力达到95％以上。Annexin V-FITC和PI双染流式细胞仪检铡模型组大鼠胃平滑肌细胞的凋亡率(12.416％±2.625％)显著高于对照组(2.145％±0.573％)，P<0.01。 7．JC-1染色流式细胞仪检测模型组大鼠胃平滑肌细胞线粒体跨膜电位(红色荧光强度：3.12±0.52，绿色荧光强度：8.21±0.99，红色荧光阳性细胞百分率：50.58％±3.84％，绿色荧光阳性细胞百分率：36.4％±2.96％)显著低于对照组(红色荧光强度：1.71±0.33，绿色荧光强度：13.51±1.90，红色荧光阳性细胞百分率：35.11％±4.38％，绿色荧光阳性细胞百分率：50.42％±4.08％)，P<0.01。 结论： 1．链脲佐菌素一次性腹腔内注射能成功建立糖尿病胃轻瘫大鼠模型。 2．糖尿病胃轻瘫大鼠胃平滑肌细胞线粒体膜电位降低，引起细胞凋亡率增加，这种线粒体途径所致的细胞凋亡率增加，可能是糖尿病大鼠胃动力障碍即“胃轻瘫”发生的原因之一。