【摘 要】
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背景与目的:在世界范围内,男性不育人数占不孕不育总人数50%左右,影响大约10%的生育年龄阶段男性。最近研究表明,磷酸二酯酶-5（Phosphodiesterase-5,PDE5）抑制剂能提高精子的活力。本研究探讨不同浓度的伐地那非在体外对弱精子症精子运动功能、精子形态、精子细胞膜完整性、精子DNA碎片指数的影响,并且探索伐地那非预处理对精子冷冻复苏后活力的影响,为精子冷冻保存、男性不育的诊断、体
【基金项目】
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国家自然科学基金（81501243,81571488,81771637）； 上海市卫生和计划生育委员会科研课题（201440009）； 上海交通大学医学院附属仁济医院种子基金（RJZZ14-017）；
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背景与目的:在世界范围内,男性不育人数占不孕不育总人数50%左右,影响大约10%的生育年龄阶段男性。最近研究表明,磷酸二酯酶-5（Phosphodiesterase-5,PDE5）抑制剂能提高精子的活力。本研究探讨不同浓度的伐地那非在体外对弱精子症精子运动功能、精子形态、精子细胞膜完整性、精子DNA碎片指数的影响,并且探索伐地那非预处理对精子冷冻复苏后活力的影响,为精子冷冻保存、男性不育的诊断、体外治疗以及人工授精等辅助生殖技术提供帮助。方法:第一部分:伐地那非对特发性弱精子症体外培养活力的影响根据排除标准和纳入标准收集30例仁济医院生殖医学中心门诊就诊的男性患者的精液标本。每份精液标本分装5支试管内,留取一份为对照组,其他4组分别加入配置好的伐地那非工作液,伐地那非终浓度分别为0.4μg/m L、4μg/m L、40μg/m L、400μg/m L。将各试管轻轻振荡后37℃水浴锅中孵育,于0、15min、30min、60min、90min后,按WHO《人类精液检查与处理实验室手册》（第五版）标准,应用WLJY-9000型伟力彩色精子质量检测系统检测精子浓度、精子活力;吖啶橙染色法检测精子DNA碎片指数（DFI）;应用巴氏染色法按WHO《人类精液检查与处理实验室手册》（第五版）标准严格判读精子形态,评估正常形态精子百分率;伊红染色法检测精子活率;根据前期结果,选择伐地那非最适浓度及最佳处理时间,用免疫分光光度法检测精子的c AMP与c GMP含量,分析各指标的变化。第二部分:伐地那非预处理对精子冷冻效果的影响根据排除标准和纳入标准收集30例上海市人类精子库捐精的体检者的精液标本。加入伐地那非溶液,使伐地那非终浓度分别为0、0.4μg/m L、4μg/m L、40μg/m L、400μg/m L,室温孵育5 min。加入保护剂并充分混匀,精液与保护剂的比例为2∶1。室温平衡5 min后装入1.0 m L的冷冻管中,直接投入CRYOPLUS 1型一步熏蒸仪中,完成冷冻后投入液氮中保存。24 h后将精液标本取出,立即置于37℃水浴锅中复温5 min。,按WHO《人类精液检查与处理实验室手册》（第五版）标准,应用WLJY-9000型伟力彩色精子质量检测系统检测精子活力、前向运动精子百分率;应用改良巴氏染色法按WHO《人类精液检查与处理实验室手册》（第五版）标准严格判读精子形态,评估正常形态精子百分率。结果:第一部分:伐地那非对特发性弱精子症体外培养活力的影响伐地那非处理精子后,在作用30min且浓度为4μg/m L时,精子的活力显著增加（P＜0.01）,正常形态精子百分率与对照组相比无统计学差异（P＞0.05）,精子活率与对照组相比增高（P＜0.05）,精子DNA碎片指数（DFI）与对照组相比没有统计学差异（P＞0.05）,精子的c AMP和c GMP含量均显著增加（P＜0.01）。第二部分:伐地那非预处理对精子冷冻效果的影响复苏后,0、0.4、4.0、40.0、400.0μg/m L伐地那非处理后的前向运动精子百分率分别为（41.47±9.80）%、（42.57±9.60）%、（47.77±8.55）%、（37.27±8.47）%、（26.37±6.99）%。与对照组（0μg/m L伐地那非组）比较,4.0μg/m L伐地那非处理后的精子复苏后活力有显著改善,差异有统计学意义（P=0.034）。结论:1.伐地那非在体外能明显改善弱精子症患者精子运动能力,其最佳浓度为4μg/m L,本研究为临床弱精子症提供了新的药物治疗基础。伐地那非是否能被用于精子活动低下所致不育症的治疗,及用于人工授精或体外受精前的精子运动的激动剂,有待进一步的研究。2.适当浓度的伐地那非预处理精液能提高精子冷冻复苏后的活力,这为临床进一步研究优化精液冷冻方案提供了可靠的依据。但是否能进行临床应用,还有待进一步研究。
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