随着人类基因组计划的实施和推进，生命科学已经进入了后基因组时代。作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一，蛋白质组学的研究得到了越来越多的关注。目前蛋白质研究面临的一个重要问题是在复杂生物体系中不同种类蛋白质的含量相差很大。低丰度蛋白质中往往会包含一些生命过程中起关键性作用的蛋白质，而高丰度蛋白质的大量存在对低丰度蛋白质产生夹带、包覆，以至掩盖的作用。探索新的分离方法和技术，解决复杂生物体系高丰度蛋白质的去除和低丰度蛋白质的富集是当前蛋白质研究所要面临的瓶颈问题之一。　　 分子印迹技术具有高选择性和易操作性，是近年来发展较为迅猛的一种新颖的分离技术。温敏型聚合物在蛋白质印迹方面很有前景，具有良好的生物兼容性和智能响应性。将温敏型聚合物用于蛋白质分子印迹可有效地提高印迹效果和选择性。本课题开展了几类温敏型的蛋白质分子印迹聚合物制备方法及应用方面的研究。本论文内容包括：　　 1.综述了分子印迹技术的研究进展及应用；新型分子印迹材料的发展概况；蛋白质组学的需求；蛋白质分子印迹聚合物的意义、困难、制备方法及应用；此外，还简要介绍了本论文的研究意义和研究内容。　　 2.在第二章中，采用本体印迹的方法制备了一种新型的大孔温敏型蛋白质印迹水凝胶。这种蛋白质印迹水凝胶通过金属螯合作用能够选择性识别模板分子溶菌酶。大孔温敏型水凝胶的智能响应性质和金属螯合作用的协同效应有效的改善了蛋白质印迹水凝胶对模板蛋白质溶菌酶的选择性和吸附容量。本工作对冰冻聚合的时间和螯合单体的用量对温敏型印迹水凝胶的亲和能力的影响进行了系统考察。此大孔温敏型蛋白质印迹水凝胶不但对外界条件的改变产生响应性，而且对模板蛋白质也能产生一定的智能响应性收缩。在识别蛋白质的过程中，温敏型印迹水凝胶对蛋白质的作用能够通过添加与不添加铜离子在螯合效应和静电效应之间转换。本大孔温敏型蛋白质印迹水凝胶的制备方法简单，效果良好，可用于从蛋白质混合样中和实际样品中分离模板蛋白，并表现出一定的高选择性。　　 3.在第三章中，采用表面印迹的方法，通过表面引发活性自由基聚合（SIP）制备温敏型蛋白质印迹微球(MIP beads)。然后再通过第二步的SIP，制备用聚异丙基丙烯酰胺(PNIPAM)包覆的分子印迹微球(coated-MIP beads)。Coated-MIPbeads由两层组成，内层为温敏型溶菌酶(lysozyme)印迹层，外层是聚异丙基丙烯酰胺层（PNIPAM）。通过实验表征发现，coated-MIP beads在模板蛋白lysozyme的选择性方面和温度响应性方面都优于只有一层温敏型溶菌酶印迹聚合物的印迹球( MIP beads)。Coated-MIP beads在对蛋白质混合样品进行吸附后，可以在38℃或23℃时，分别释放出参照蛋白质和模板蛋白质。而相应的非印迹球(coated-NIP beads)没有这种双重温度响应开关来选择性识别蛋白质。这种温度可控性蛋白质印迹球体系可以控制蛋白质的选择性释放。在化学载体、药物释放体系和传感方面有潜在应用价值。　　 4.在前两章研究的基础上，探索了温敏型蛋白质印迹整体柱的制备方法。将温敏型蛋白质印迹聚合物（MIP）修饰到硅胶骨架表面，制备温敏型蛋白质印迹整体柱(MIP monolith)。通过优化硅烷化试剂、致孔剂、催化剂的种类和配比，确定硅胶骨架制备条件。硅胶整体柱骨架由两种硅烷化试剂——甲基三甲氧基硅烷(MTMS)和γ-甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷(γ-MAPS)，经温和的一步溶胶-凝胶过程直接在不锈钢管柱中合成。实验过程中，合成了三种类型的温敏型蛋白质MIP，并将其分别修饰到硅胶骨架上，制备了相应的蛋白质印迹整体柱。系统研究了不同温度下印迹整体柱柱压和其分离能力，寻找并优化最佳印迹条件。在最佳印迹条件下，温敏型印迹整体柱对模板蛋白溶菌酶的保留能力强于相应的非印迹整体柱(NIP monolith)。温敏型印迹整体柱对溶菌酶的印迹因子(IF)在20℃达到了3.48。在进一步对温敏型印迹整体柱选择性能力的考察中，温敏型印迹整体柱可以在线从实际样品中分离溶菌酶。并且，此温敏型印迹整体柱有较稳定的重现性。