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背景食管癌是临床较常见的恶性肿瘤之一,主要分为食管腺癌（EAC）和食管鳞状细胞癌（ESCC）,全球90%以上的国家ESCC发病率明显超过EAC,而中国的ESCC发病率位居全球首位。早期诊断、及时治疗对于改善ESCC患者预后、提高生存率至关重要;但传统的诊断方法如纤维内镜与黏膜组织活检具有局限性,常规肿瘤标志物亦存在敏感性和/或特异性不足的问题。近年来一些半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Cystatin,CST）与恶性肿瘤的相关性引起关注。有学者认为生物体内存在着针对半胱氨酸蛋白酶与CST之间平衡的调节,该平衡的失调在肿瘤的发生、发展中起到重要作用。我们的前期研究表明半胱氨酸蛋白酶抑制剂1（CST1）蛋白在早期ESCC患者癌组织中存在异常高表达,是否CST1在ESCC患者的血清中亦存在高表达值得探讨,为此我们构建了化学发光免疫分析（CLIA）法进行小样本队列的血清CST1检测,结果显示CST1在早期ESCC患者组的水平与阳性率均明显高于食管良性病变（EBL）患者组与健康对照（HC）组（P<0.05）,提示血清CST1的检测可能有助于ESCC的早期诊断。目的基于前期的研究基础,我们拟（1）对构建的CLIA法进行系统的方法学评价,评估其检测性能;（2）扩大样本规模检测,深入探讨血清CST1检测对ESCC早期诊断、病情评估、疗效监测与预后判断的价值;（3）分析血清CST1与常规肿瘤抗原类标志物之间的相关性,在保证特异性的前提下,建立两者的联合检测模式,以进一步提高对ESCC早期诊断的敏感性。方法1.通过免疫组织化学法检测22例早期ESCC患者癌组织及配对癌旁组织的CST1蛋白表达。2.对构建的CLIA法进行系统的方法学评价,评价内容包括线性范围、最低检出限、准确度、精密度、干扰实验、样本稳定性、试剂稳定性。3.基于构建的CLIA法行扩大样本规模【112例早期（0期、Ⅰ期、Ⅱ期）ESCC患者、101例晚期（Ⅲ、Ⅳ期）ESCC患者、107例EBL（食管糜烂、食管平滑肌瘤等）患者、151例健康对照】的检测,观察早期ESCC患者组血清CST1的表达水平以及不同病程ESCC患者之间血清CST1水平的变化情况,探讨血清CST1检测对ESCC早期诊断、病情评估的价值。4.通过对28例ESCC患者手术前后血清CST1水平变化的比较,探讨血清CST1检测对ESCC疗效监测的价值。5.通过临床病例资料回顾及电话随访等方式密切追踪治疗后ESCC早期患者的复发情况,探讨血清CST1检测对ESCC预后判断的价值。6.采用化学发光法检测ESCC患者血清常规抗原类肿瘤标志物CEA、SCC和CYFRA21-1的水平,研究3种常规抗原类标志物检测对ESCC早期诊断的性能。7.分析CST1与3种常规肿瘤抗原类标志物之间的相关性,在保证特异性的前提下,建立两者的联合检测模式,以进一步提高对ESCC早期诊断的性能。结果1.构建的CLIA法检测血清CST1的线性范围为6.25～400 U/ml;最低检出限1.35 U/ml;平均回收率102.65%;本方法的低、高水平批内精密度分别为4.43%、1.94%,均<1/4TEa;批间精密度分别为1.39%、1.90%,均<1/3TEa;血红蛋白、类风湿因子对本方法无显著干扰,重度脂血和黄疸对低浓度CST1的检测存在一定的干扰;样本的4℃保存稳定性良好;试剂的25℃、37℃热稳定性与4℃效期稳定性良好。2.ESCC早期患者癌组织CST1表达阳性率81.8%（18/22）,而配对癌旁组织表达均为阴性。3.以68.33U/ml为cutoff值,ESCC早期患者血清CST1的水平与阳性率均明显高于EBL、HC组（P<0.05）;血清CST1对ESCC早期患者的诊断敏感性31.25%（特异性92.64%）,AUC达0.654。4.ESCC晚期患者组血清CST1水平（81.29±56.17 U/ml）明显高于ESCC早期患者组（60.08±42.36 U/ml）（P<0.05）。5.28例ESCC患者手术后血清CST1水平（37.49±23.98 U/ml）,明显低于手术前血清CST1水平（53.32±23.37 U/ml）（P<0.05）。6.20例ESCC复发患者组血清CST1水平（88.46±50.39 U/ml）明显高于无复发患者组（53.92±37.98 U/ml）（P<0.05）,且50%复发患者组复发前血清CST1高于正常参考水平68.33U/ml。7.ESCC早期患者组血清CEA的水平与阳性率均明显高于EBL组/HC组（P<0.05）;ESCC早期患者组血清CYFRA21-1、SCC的阳性率明显高于EBL组/HC组（P<0.01）,而水平与EBL组/HC组无显著差异（P>0.05）;3种常规抗原类肿瘤标志物对早期ESCC的敏感性介于10.81%-29.73%,特异性均>92.0%,其中以SCC对ESCC早期患者的AUC最高,达0.722。8.CST1与3种常规抗原类肿瘤标志物的联合检测模式中,以CST1与CEA、SCC的联合检测对ESCC早期患者的AUC最高,达0.726（95%CI0.653-0.798）,诊断敏感性44.59%（特异性92%）。结论1.构建的化学发光免疫分析法对血清CST1具有良好的检测性能。2.血清CST1检测对ESCC具有早期诊断、病情评估、疗效监测、预后判断的价值。3.3种常规抗原类肿瘤标志物单独检测对ESCC的早期诊断价值有限;CST1与CEA、SCC的联合检测模式可进一步提高对ESCC的早期诊断性能。