论文部分内容阅读
脂肪组织慢性炎症在肥胖引起胰岛素抵抗过程中发挥关键作用，但其发生机制尚不清楚。前脂肪因子是前脂肪细胞分泌的一类特异性蛋白，同时具有重要的促炎活性。但目前针对前脂肪因子与脂肪慢性炎症及胰岛素抵抗之间关系的研究甚少。另外，尽管慢性炎症在胰岛素抵抗中具有重要作用，但目前的抗炎方法在改善胰岛素抵抗方面的效果并不理想。因此，有待开发新的抗炎药物用于胰岛素抵抗的治疗。本课题通过以下三部分研究探讨了前脂肪因子与肥胖之间的关系及其在脂肪慢性炎症和胰岛素抵抗中的作用，并探讨了GLP-1在抑制炎症方面的作用。一、前脂肪细胞的炎症特性目的：探讨前脂肪细胞的炎症特性及其与巨噬细胞之间的相互作用。方法：通过定量PCR等方法比较3T3-L1前脂肪细胞与成熟脂肪细胞在各种炎症因子表达水平上的差异；观察RAW264.7巨噬细胞条件培养液对前脂肪细胞内炎症因子表达的影响。并通过transwell的方法，进一步观察前脂肪细胞条件培养液对巨噬细胞的趋化作用。结果：3T3-L1前脂肪细胞内IL-6、MCP-1以及RANTES等炎症介质的表达水平显著高于成熟脂肪细胞内相应炎症介质的表达水平。并且，巨噬细胞条件培养液能进一步促进前脂肪细胞内各炎症因子的表达。另外，前脂肪细胞条件培养液则能显著促进巨噬细胞的迁移。结论：前脂肪细胞较成熟脂肪细胞具有更显著的炎症特性，并且能通过分泌因子与巨噬细胞发生相互作用，加重炎症反应。二、前脂肪因子FSTL1与肥胖之间的关系及在胰岛素抵抗中作用和机制目的：探讨新的前脂肪因子卵泡抑素样蛋白1（FSTL1）与肥胖之间的关系及其对脂肪慢性炎症和胰岛素敏感性的影响和机制。方法：通过定量PCR、Western blot等方法检测3T3-L1前脂肪细胞分化过程中FSTL1表达水平的变化以及炎症因子对成熟脂肪细胞内FSTL1表达的影响；检测肥胖小鼠脂肪组织内以及肥胖人群血清中FSTL1表达水平的变化。并通过体外干预实验，观察FSTL1重组蛋白对3T3-L1脂肪细胞及RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响，以及FSTL1对脂肪细胞胰岛素敏感性的影响。结果：随着3T3-L1前脂肪细胞的分化，FSTL1表达水平明显降低，而TNFα能诱导成熟脂肪细胞内FSTL1的表达。在遗传性肥胖小鼠和高脂喂养肥胖小鼠的皮下及内脏脂肪组织中，FSTL1的表达水平较正常小鼠显著升高。同样，肥胖人群的血清FSTL1水平也明显升高，且与BMI呈正相关关系。体外研究表明，FSTL1重组蛋白能激活脂肪细胞和巨噬细胞内的IKKβ-NFκB及JNK通路，并促进TNFα、IL-6、MCP-1等炎症因子的表达。此外，FSTL1还能显著抑制3T3-L1脂肪细胞内胰岛素信号通路的传导和GLUT4的膜转位。结论：FSTL1是一种新的前脂肪因子，其体内表达水平与肥胖密切相关。同时，FSTL1具有显著的促炎活性，能激活脂肪细胞和巨噬细胞内的炎症通路并诱导炎症因子的表达。另外，FSTL1还能显著降低脂肪细胞的胰岛素敏感性。因此，FSTL1可能是连接肥胖与脂肪慢性炎症及胰岛素抵抗的重要介质。三、GLP-1的抗炎作用目的：探讨GLP-1的抗炎活性。方法：通过定量PCR、Western blot等方法观察GLP-1干预对基础状态下和激活状态下3T3-L1前脂肪细胞内炎症因子表达以及炎症通路活化的影响；并通过Transwell的方法，观察GLP-1对巨噬细胞迁移的影响。结果：GLP-1能显著抑制基础状态下和激活状态下3T3-L1前脂肪细胞内IL-6、MCP-1等炎症介质的表达，同时抑制NFκB通路的活化。此外，GLP-1尚能明显降低前脂肪细胞分泌因子对巨噬细胞的趋化作用。结论：GLP-1能抑制前脂肪细胞内炎症通路的活化以及炎症介质的表达，并能削弱前脂肪细胞对巨噬细胞的趋化作用，表明GLP-1具有显著的抗炎作用。