论文部分内容阅读
MicroRNAs(miRNAs)是一类长约20~25个碱基的小分子非编码RNA,可通过引发靶mRNA降解或/和翻译抑制来介导转录后的基因沉默。microRNA作为一种真核生物体内的重要的调节因子,近年来在动物和植物中被广泛的研究。miRNA-1和miRNA-133在人、小鼠等骨骼肌细胞分化成熟过程中表达呈现一定的时空特异性,在骨骼肌中,miRNA-1以HDAC4为靶点促进肌发生(myogenesis),而miRNA-133通过抑制血清反应因子(serum response factor,SRF)而提高成肌细胞的增殖速度,这表明二者在调节骨骼肌增殖与分化过程中扮演了十分重要的角色。本实验依据人和鼠等动物的miRNA-1和miRNA-133的成熟序列,根据miRNA高度保守性的特点,设计了特定的RT引物和PCR引物,采用PCR方法获得正确的序列,构建TA质粒载体,确定了猪的miRNA-1和miRNA-133成熟序列与人、鼠一致。建立了一个特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快的实时定量荧光RT-PCR方法,研究了miRNA-1和miRNA-133在猪背最长肌组织中的表达情况,对不同品种的成熟猪的背最长肌组织中miRNA-1和miRNA-133的表达进行检测,通过测定三个品种猪的miRNA-1在背最长肌中的表达量,结果显示,miRNA-1在长白猪的2-△CT平均值是1.5216±0.3846,蓝塘猪的2-△CT平均值是7.2453±0.5975,大花白猪的2-△CT平均值1.1391±0.1713,这些数值说明,miRNA-1在蓝塘猪中的表达量最高,达到7.2453±0.5975,是长白猪表达量的4.7倍,大花白猪的6.4倍,因此蓝塘猪与长白猪和大花白猪表达有极显著的差异(P<0.01)。长白猪与大花白猪miRNA-1表达量差异不显著(P>0.05)。对miRNA-133在背最长肌中的表达结果分析显示,miRNA-133在蓝塘猪中的表达量同样是最高,达到1.6989±0.2086,蓝塘猪与长白猪miRNA-133表达量差异是不明显的(长白猪的2-△CT平均值是1.3416±0.1042)(P>0.05),蓝塘猪与长白猪与大花白猪表达量(0.2337±0.0358)差异极显著(P<0.01),蓝塘猪与长白猪miRNA-133的表达量分别是大花白猪的7.2倍和5.7倍。因此蓝塘猪和长白猪与大花白猪表达有极显著的差异(P<0.01),蓝塘猪与长白猪miRNA-133表达量差异不显著(P>0.05)。