河南PCV2的分离鉴定及Cap蛋白的表达与纯化

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猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus 2,PCV2)能够引起断奶仔猪多系统衰竭综和症、猪皮炎肾病综合征、猪先天性震颤、猪呼吸道病综合征等多种传染性疾病。近年来,PCV2在国内和国外迅速传播,随着PCV2在各地广泛的传播并间歇式的爆发,PCV2引起的传染病给畜牧养殖业带来了很大的损害。因此,PCV2的诊断和预防也成为各国学者的研究重点。为了筛选培育PCV2优良毒株,本研究对来自河南省不同地区猪场的11份疑似断奶仔猪多系统衰竭综和症的病料进行研磨处理,通过PCR检测将检测结果为阳性的病料研磨液接种PK-15细胞进行病毒的筛选,通过IPMA进一步确定病毒的增殖情况,将检测结果为阳性的PCV2全基因组进行克隆、测序,结果成功分离一株毒力较强的PCV2b。本研究成果为PCV2病毒株的筛选和全病毒灭活疫苗的制作及选择提供依据。为了建立一种快速、特异、精确的PCV2检测方法,本试验根据PCV2的核苷酸序列设计特异性引物,以阳性标准品为模板,建立了一种SYBRGreen荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型的诊断方法。结果表明该方法的灵敏度高,达到3.0×10~2拷贝/mL。从溶解曲线分析其引物的特异性好,无引物二聚体,没有交叉反应,可重复性好,适合猪圆环病毒2型临床样品的检测。基于PCV2结构蛋白(Capsid)能在体外自组装成病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)的特性,我们采用原核表达系统的方法对重组的Cap蛋白进行了可溶性表达,通过对表达条件的优化,获得了Cap-His的最佳表达条件。通过Ni-NAT亲和层析纯化重组蛋白获得纯度较高的重组蛋白,为新型PCV2 VLPs亚单位疫苗的研制奠定了基础。
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