论文部分内容阅读
[目的]临床放化疗所致的免疫抑制是患者不良预后的主要原因,寻找一种修复免疫抑制安全有效的方法能够提高患者的治疗效果和预后。本实验通过建立放疗免疫抑制小鼠模型,观察骨髓干细胞的输注对放疗免疫抑制小鼠的修复作用,再观察人脐血干细胞输注后对裸鼠的影响。为脐血用于临床治疗放化疗所致的造血细胞损伤和免疫抑制病人提供理论依据和实验基础。[方法]采用放疗照射的方法建立小鼠骨髓细胞损伤和免疫抑制模型,随后用血细胞仪检测外周血白细胞、流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群、胸腺细胞凋亡率,HE染色观察小鼠骨髓病理切片的变化。将骨髓干细胞通过尾静脉输注至免疫抑制小鼠体内后,利用血细胞分析仪分析外周血血常规,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、ELISA试剂盒检测血清免疫球蛋白IgM变化情况,并观察生存状态和存活率。人脐血干细胞输注后对裸鼠的影响:选择NOD/SCID小鼠,经4Gy剂量的x线照射后,随机分为实验组和对照组,分选脐血有核细胞,通过尾静脉输注至实验组裸小鼠,流式细胞仪检测人源的CD45、CD3和CD19分子表达,并观察小鼠存活情况。[结果]6.0Gy照射组小鼠30d存活率为100%; 8.0Gy照射组小鼠12天后死亡2只,30d存活率为10% ; 10.0Gy照射组小鼠30d存活率为0。因此,确定研究导致小鼠骨髓细胞和免疫功能损伤的放疗照射剂量为8.0Gy。小鼠骨髓干细胞输注至放疗后小鼠体内后,60d存活率为80%,并且移植后小鼠未观察到移植物抗宿主病(GVHD)等现象,而未经输注干细胞的小鼠60d存活率为10%;输注干细胞后小鼠外周血白细胞数、淋巴细胞比例及CD3+T细胞亚群较未经移植的小鼠高(P<0.05);在输注干细胞后第15天,CD4+%、CD8+%和免疫球蛋白IgM最低,随后逐渐升高(P<0.05);骨髓干细胞移植后能降低辐射后小鼠外周血单核细胞比例及CD4+/CD8+比值(P<0.05)。人脐血干细胞输注入4Gy剂量的x线照射实验组NOD/SCID裸小鼠后,同对照组的裸鼠比较,实验组裸鼠30d存活率为70%,对照组裸鼠30d的存活率为10%。并且,通过流式细胞仪,我们在实验组的裸小鼠体内检测到了人源的CD45、CD3、CD 19分子表达。[结论]本实验成功建立放疗致小鼠骨髓细胞损伤和免疫抑制模型;输注同种系小鼠骨髓造血干细胞具有造血重建和免疫功能修复作用;异种(人)脐血干细胞能够显著延长放射后裸鼠的生存期,在裸鼠实验研究中提示异种(人)脐血干细胞有重建造血和免疫系统的征象。