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我国是胃癌高发国家,早期胃癌诊治效果良好,十年生存率近90%。但是目前对早期胃癌的检出率仍较低,超过60%的患者在初次就诊时已经进入中晚期,其5年总生存率低于30%。早期胃癌局限于粘膜和粘膜下层,发病时缺乏特异性症状,因此早期检出率不高。当因消化不良、贫血等症状就诊时,病情往往已经发展到了中晚期阶段,此时单纯手术治疗效果较差,需联合化疗、生物治疗等手段。胃癌的发生伴随多种基因的表达异常,主要包括原癌基因的过表达和抑癌基因的表达下调或功能缺失。近年来人们期望在分子水平寻找治疗胃癌的新方法,寻找特异性分子标志物用于胃癌的早期诊断及分子靶向治疗。叉头蛋白A2(forkhead box A2,FOXA2),也称为肝细胞核因子3β(HNF3β),是重要的转录因子,在肿瘤进程中的作用已引起广泛关注,FOXA2的表达下调或功能缺失与肝癌、胃癌、肺癌等发生发展密切相关。FOXA2的过表达能够明显抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡及降低克隆形成的能力,表明FOXA2作为公认的肿瘤抑制因子,可能具有分子靶向治疗作用靶点的潜在功能,但其在胃癌中的具体作用机制尚不明确。目的:构建并获取携带FOXA2基因的重组腺病毒,探讨腺病毒介导的FOXA2基因过表达对胃癌细胞增殖、迁移的影响,并对其发生机制进行初步分析。方法:根据FOXA2mRNA的序列,设计合成扩增FOXA2基因的特异性引物,PCR获得FOXA2全长编码基因,构建重组腺病毒表达载体,经多次感染HEK293细胞和病毒的不断扩增后,经氯化铯密度梯度离心法纯化,进一步获得具有稳定感染性的高效价重组腺病毒Ad5.FOXA2。应用重组腺病毒Ad5.FOXA2感染胃癌细胞系AGS,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测FOXA2基因转录和蛋白表达情况;甲基噻唑基四挫(MTT)检测Ad5.FOXA2对胃癌细胞增殖的影响,Western blot检测Ad5-FOXA2对胃癌细胞增殖作用的具体分子机理;划痕实验和小室侵袭实验检测Ad5.FOXA2对胃癌细胞的迁移的影响。结果:成功构建并纯化了携带FOXA2基因的重组腺病毒Ad5.FOXA2,获得的病毒滴度为2.12×1015pfu/L;腺病毒Ad5.FOXA2感染胃癌细胞AGS后FOXA2基因与对照组的mRNA转录水平分别为56.72±2.73和1.01±0.112,在蛋白水平上FOXA2基因的表达是对照组的3.85倍,明显上调,且均具有统计学差异(P<0.001,P<0.001)。MTT检测显示,随着时间的延长,与细胞对照组相比Ad5.FOXA2组可明显抑制细胞增殖,且差异具有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示Ad5.FOXA2组和对照组的迁移率分别为52.62%±4.86和98.86%±6.59,差异具有统计学意义(F=78.94,P<0.001);小室侵袭实验显示Ad5.FOXA2组和对照组的迁移率分别为20.79±4.06与50.19±4.93,差异具有统计学意义(F=1 18.0,P<0.001);Western blot检测发现外源性FOXA2表达后c-Myc、β-catenin、Cyclin D1和PCNA蛋白表达水平分别下调了 32%,45%,42%和36%,且均具有统计学意义(P<0.05)。结论:FOXA2基因的表达能够抑制AGS胃癌细胞系c-Myc、β-catenin、Cyclin D1和PCNA蛋白的表达,从而抑制胃癌细胞的迁移与增殖,该结果为进一步研究FOXA2基因在胃癌疾病发生发展中的作用奠定了基础。