作为脂质蓄积疾病,动脉粥样硬化却始终有炎症反应参与其中。血管壁的炎症在动脉粥样硬化发病机制中具有重要作用。近期的研究进展显示炎症确实是介导动脉粥样硬化各个时期病理发展的基础。值得注意的是Toll样受体家族成员构成动脉粥样硬化炎症反应的重要组分。TLRs是在天然免疫信号传导以及触发炎症反应当中起到关键作用的一个受体家族。当相应的配体结合于该受体时会引起转录因子NF-κB活化,从而造成一系列炎症因子基因表达上调。最近的研究显示除了TLR4,TLR2在动脉粥样硬化斑块形成当中也发挥了重要作用。TLRs的配体,不论是微生物来源的还是炎症反应中存在或产生的,都可能参与了动脉粥样硬化病理过程。最近的研究关注血小板在动脉粥样硬化中的作用。血小板通过与炎症细胞相互作用而参与动脉粥样硬化发生发展过程。来源于血小板蛋白水解后的一种蛋白质,C-X-C细胞因子亚家族成员PF4可能参与动脉粥样硬化进程,近来许多研究都支持这种观点。Yu G等人的研究显示PF4促进内皮细胞表达炎症因子E选择素。PF4可能在某些炎症性疾病如动脉粥样硬化当中起到了联结血小板与内皮细胞、巨噬细胞的作用。本实验研究TLR2与PF4在apoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块中的表达情况,并通过细胞实验研究PF4对内皮细胞TLR2表达的影响。第一部分apoE-/-小鼠粥样斑块表达PF4及TLR2目的观察高脂饲养的apoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块表达PF4和TLR2的情况。方法高脂饲料喂养apoE-/-小鼠12周,建立动脉粥样硬化小鼠模型。安乐死处死动物,原位灌流,取主动脉于10%中性缓冲福尔马林中固定,石蜡包埋连续切片,HE染色观察动脉粥样硬化斑块形态,免疫组织化学检测斑块TLR2和PF4的表达。结果apoE-/-小鼠血脂水平明显增高,主动脉HE染色可见多种形态动脉粥样硬化病变。在apoE-/-小鼠主动脉富含脂质斑块当中TLR2表达上调,其中血管内皮细胞、巨噬细胞表达TLR明显增多。apoE-/-小鼠主动脉粥样斑块上也发现有PF4表达,主要表达在内皮细胞和斑块肩部。结论1.apoE-/-小鼠粥样斑块当中TLR2表达上调,且TLR2主要表达在斑块的内皮细胞、巨噬细胞上。2. apoE-/-小鼠粥样斑块中可见PF4表达。第二部分PF4对内皮细胞表达TLR2的调节作用目的观察细胞因子PF4对内皮细胞表达TLR2和炎症因子ICAM-1 mRNA表达的调节作用。方法用人重组细胞因子PF4刺激人脐静脉内皮细胞株,通过RT-PCR检测TLR2、ICAM-1mRNA水平,用Western blotting检测TLR2蛋白水平。细胞免疫组化方法检测PF4刺激后细胞表达TLR2的阳性细胞数。Western blotting检测PF4刺激后的人脐静脉内皮细胞株核蛋白NF-κB表达情况。结果PF4刺激人脐静脉内皮细胞株后促进TLR2mRNA和蛋白表达,PF4的拮抗剂肝素不能抑制这种作用。PF4促进人脐静脉内皮细胞株转录因子NF-κB活化以及炎症因子ICAM-1mRNA表达。结论PF4促进人脐静脉内皮细胞株表达TLR2,引起转录因子NF-κB活化,炎症因子ICAM-1mRNA水平上调