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目的:通过建立大鼠脑缺血再灌注模型,研究自噬在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用;探讨自噬在不同时间点的动态变化;探讨丁苯酞注射液(butyphthalide injection,NBP)对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响。方法:选取清洁级别雄性SD(Sprague Dawley)大鼠64只,体重250-300g,随机分为4组,分别为假手术组(sham组)、模型组(I/R组)、丁苯酞组(NBP组)、自噬抑制剂组(3-MA组),每组16只大鼠,将每组分成2个时间段,即缺血再灌注后24h组及72h组(每组8只),除sham组外,I/R组、NBP组及3-MA组采用改良线栓法制作大脑中动脉阻塞2h模型,NBP组于缺血同时予以腹腔注射丁苯酞注射液(6mg/kg/天,每天2次),其中72h组连续注射三天;3-MA组于术前半小时腹腔注射3-MA(10mg/kg);取3个时间点即再灌注后2h、再灌注后24h和再灌注后72h,进行神经功能评分;取2个时间点,即缺血再灌注后24h和72h后取材,采用TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride)染色法检测各组大鼠各时间点脑梗死体积;苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Eosin staining,HE)观察大鼠神经细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞自噬现象;Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达量的变化观察自噬水平。结果:1.神经功能评分的比较:与sham组比较,I/R组、NBP组、3-MA组大鼠的神经功能评分在各实验时间点都升高;与I/R组比较,NBP组及3-MA组实验大鼠的神经功能评分出现下降,差异有统计学意义(P<0.05)。2.脑梗死体积的比较:sham组未见梗死灶,I/R组、NBP组及3-MA组均可见梗死灶,与I/R组比较,NBP组及3-MA组大鼠的脑梗死体积在各时间点均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。3.自噬相关蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ的表达:与sham组比较,I/R组、NBP组、3-MA组在缺血再灌注后24h及72h自噬相关蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ的表达均有所增加,差异有统计学意义(P<0.05);与I/R组相比,NBP组和3-MA组的beclin-1和LC3-Ⅱ的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);NBP组与3-MA组比较,其表达无显著差异,无统计学意义(P>0.05)。4.脑组织HE染色观察脑组织神经细胞形态:sham组脑组织神经细胞形态正常,结构清晰。I/R组可见明显细胞排列紊乱,细胞坏死;与I/R组比较,NBP组及3-MA组细胞坏死程度减轻。5.透射电子显微镜观察自噬体:与sham组相比,I/R组可见大量典型自噬体,而与I/R组比较,NBP组及3-MA组自噬体数量明显减少。结论:1.在大鼠脑缺血再灌注损伤后,丁苯酞注射液抑制细胞自噬,改善了神经功能、减少了脑细胞坏死及减少脑梗死体积,起到神经保护作用。