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目的:基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一类Ca2+、Zn2+依赖的细胞外蛋白水解酶,可通过降解细胞外基质促进肿瘤细胞的侵袭和转移。MMP-2(Gelatinase A/72kDa type Ⅳ collagenase)和MMP-9(Gelatinase B/92kDa type Ⅳ collagenase)是两种重要的MMPs蛋白,属于明胶酶类,其表达及活性与卵巢癌密切相关。近年来有关MMP-2和MMP-9的活化调节成为人们研究的热点,其中生长因子对卵巢癌明胶酶的调节作用较为重要。已经发现EGF、bFGF、TGF等细胞生长因子能调节明胶酶的分泌,但是IGFs对于肿瘤细胞中MMP-2、MMP-9的调节研究的较少。目前关于IGFs当中的胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)对于卵巢癌明胶酶的调节国内外至今未见报道。为了进一步研究生长因子对MMPs尤其是卵巢癌MMP-2、MMP-9的调节作用,我们观察了经不同浓度IGF-Ⅱ处理过的卵巢癌细胞中两种明胶酶表达情况。 方法:将卵巢癌细胞(SKOV3、AO、3AO)以相同的浓度加入24孔培养板中,37℃培养48小时后换成无血清培养基,并加入不同浓度的IGF-Ⅱ继续培养18小时。收集细胞上清,采用明胶酶谱法测定不同浓度的IGF-Ⅱ刺激后的人卵巢癌细胞株培养上清中的MMP-2和 中文摘要MMP习蛋白表达。同时收集细胞总RNA,用反转录-聚合酶链式反应(reverse ranscnptase-polymerse chain reaction,RTICR)的方法检测上述三株卵巢癌细胞op2InRNA、Wp习 ITltNA在不同浓度的IGF二 作用下的表达情况。此外,为了排除细胞增殖在该实验中的影响,我们使用 H乙T妞法测定不同浓度的 IGFll作用后卵巢癌细胞的增殖情况。 结果:()通过明胶酶谱法检测,我们发现卵巢癌细胞株SKOV3 没有检测到MMP上 的蛋白表达,可检测到MMP习的表达;卵巢癌细胞株AO可检测到MMP刁的表达,但检测不到ip习的表达:卵巢癌细胞株3A0均检测不到两种酶的蛋白表达。u)三株卵巢癌细胞SKOV3、AOJ AO,通过反转录-聚合酶链式反应检测发现SKOV3表达MMP习 mRNA,而不表达MNp上 II~mNA;细胞株AO和 3 AO既表达 MMP上 InRNA,又表达 MMP-9 IllltNA。门)明胶酶谱法检测发现SKOV3在正常培养条件下分泌 MMP-9,经 10ngml. 50ng/ml. 100ng/ml的 GF二单独处理细胞 18小时后,能进一步增加 MMP习的表达,增加b例分别为 47.83+2.54%,80.17十2.52%,74*3+4.ZI%,与对照组相比,均有显著性差别 o功刀5人 我们发现未经刺激的 SKOV3和 IGFll刺激后的培养上清中均检测不到 ii,上的分泌,说明 IGFJ不刺激 SKOV3分泌 MMP上蛋白。用明胶酶谱法观察IGF门刺激AO的明胶酶表达情况,结果表明:AO只分泌少量的ip士,将IGFll加入到培养液中去,能进一步增加MM上的表达。从浓度一效应曲线中我什]发现 10ng/ml. 50ng/ml. 00ng/ml的 二 中文摘要 IGFll 能显著增加 MMP刁 表达,增加比例分别为 17.45+2.54%,94*9+11*3%,40.68+7*8%,与对照组相 比差别有极显著巾<0刀1人但*O刺激前后都检测不到 92kDa的ip习明胶酶水解带。卵巢癌细胞3AO正常培 养条件下明胶酶谱法检测不到ip工和ip习的表达 ,经IGFll刺激后仍无两种明胶酶的分泌。此外,我们发 现整个实验过程中各细胞培养基中均检测不到MMP二、 MMP习活化型的表达。N)采用 RTPCR法测定*FI 对卵巢癌细胞中 ip上 InRNA,MMP习 mRNA表达的影 响。实验发现刺激后SKOV3的MNp习 InRNA量并无显 著增加(P>0刀5)。1**11刺激前后的S***3均检狈不至 MMP工 InRNA的表达。未经刺激的AOJAO通过RTPCR 法可以检测到 ip< InRNA和 MMPq InRNA的表达, 经阳F丁 作用后两种明胶酶的表达未见显著增加0>0.05 ): 即使增加 IGFll的浓度也不能增加其表达。门)采用 H’掺入法测定细胞生长情况。从浓度-生长曲线上我们发 现,在这种细胞培养条件下,IGFll刺激卵巢癌细胞的增 殖差别均不显著 0>o刀5人 不同浓度的IG卜11对卵巢癌 细胞的增殖,相互间也不具有显著性差别 o列刀引。 结论:卵巢癌细胞中既存在着MNp2的高表达,又 存在着MMPq的高表达。IGF工 对于卵巢癌细胞中明胶 酶的调节作用在基因水平上不起作用;但在转录后蛋白水 平上,IGF二 能促进卵巢肿瘤中oM上和MMP习的进一 步分泌。IGFJ对于明胶酶的活化作用对于促进卵巢肿瘤 细胞的侵袭和转移具有重要的调节作用。ip2、ip习 分泌量的增加能促进细胞外基质的大量降解,从而为肿瘤 3