拉曼光谱技术在乙型病毒肝炎血清诊断试验中的应用

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目的:研究应用拉曼光谱技术通过血清检测以筛查感染乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)血清。方法:1.分别选择HBV感染血清和非HBV感染血清各20例,用拉曼光谱仪在不同波长条件下进行检测,以选择最佳实验条件。2.在上述最佳条件下,选择500例研究组血清标本、500例对照组血清标本进行检测,首先将测定的光谱图运用自适应迭代重加权惩罚最小二乘法(adaptive iterative re-weighted penalized least squares,airPLS)进行拉曼光谱中扣除荧光背景,然后运用主成分分析法(Principal Component Analysis,PCA)将处理后的拉曼光谱进行主成分特征提取,接着运用支持向量机(Support Vector Machine,SVM)进行建模和预测,粒子群优化(Particle Swarm optimization,PSO)算法代替传统的网格搜索来优化SVM的参数。最后建立感染HBV血清的诊断模型。3.采用盲法方法按照所建立的模型和运用荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术检测600例血清进行检验效能验证。4.用PCR-反向点杂交法选择151例感染HBV血清判断是否rtV204基因突变,用拉曼光谱技术检测151例血清标本后,将所测光谱图运用airPLS扣除荧光背景、偏最小二乘法(Partial Least Squares,PLS)特征提取、SVM建模和预测,建立感染HBV且rtV204基因位点突变的诊断模型。结果:1.本实验最佳实验条件时激发波波长为532nm。2.在拉曼光谱谱图中发现,位移509、957、1002、1153、1512、1648、2155、2305cm-1处正常人拉曼峰与乙型病毒肝炎患者存在差异。运用airPLS-PCA-PSO-SVM建立建立感染HBV血清的诊断模型的准确性为93.1%、灵敏度为100%、特异度为88%,ROC曲线下面积为0.942。3.本研究中我们发现感染HBV且rtV204位点基因突变血清标本与未突变的血清标本的拉曼峰值在877、957、1002、1154、1281、1447、1514、1654、2993cm-1处存在着很大的差异。airPLS-PLS-PSO-SVM模型对于感染HBV且rtV204基因位点突变的血清的诊断准确性为84.78%、灵敏度为68.75%、特异度为93.33%,ROC曲线下面积为0.847。4.运用盲法进行两组检验效能验证,第一组:灵敏度:87%,特异度:92%,KAPPA值:0.79;第二组:灵敏度:80%,特异度:79%,KAPPA值:0.59。结论:该初步研究表明,血清拉曼光谱技术结合airPLS-PCA-PSO-SVM模型可用于乙型病毒肝炎筛查。airPLS-PLS-PSO-SVM模型对于HBV的rtV204基因位点突变的诊断具有非常好的灵敏度及特异度。
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