背景与目的:自体静脉移植手术是肢体缺血性疾病或冠心病治疗的重要手段之一,但术后移植物发生再狭窄,导致血管闭塞影响其长期疗效。研究表明,移植物再狭窄和血管平滑肌细胞增殖密切相关,但其具体机制尚未完全阐明,其中涉及到一系列的细胞因子、功能性蛋白质以及胞内信号转导途径等。蛋白激酶-C(PKC)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,与细胞胞内的多种信号转导过程有关。其中的PKC-α是其传统型同工酶中的一种,与多种细胞的增殖、分化有关,但其是否参与移植静脉的平滑肌增殖尚不明了。本研究拟采用兔自体静脉移植模型,通过检测移植静脉内的PKC-αmRNA与蛋白的变化,进一步阐明其与血管平滑肌细胞增殖的关系,为寻找一种新的预防自体静脉移植后再狭窄的治疗方法提供理论依据。方法:1、建立兔的颈部自体静脉移植模型。2、光镜观察移植后血管内膜增生病理情况。3、动态观察移植后血管PKC-αmRNA、蛋白表达的变化。3.1 Real-Time PCR法检测移植静脉PKC-αmRNA表达。3.2 Western Blot法检测移植静脉PKC-α蛋白表达。3.3 SP免疫组织化学染色法检测移植静脉PKC-α蛋白表达。结果:1、建立兔的颈部自体静脉移植模型。1.1实验过程中,1例血管吻合失败,1例手术后2周静脉桥阻塞。损失样本均补足。1.2肉眼观察:取材时见动物切口愈合良好,未见感染,移植静脉与周围组织轻度粘连,移植静脉搏动良好,移植静脉管壁不同程度增厚,管腔不规则,呈静脉动脉化表现。2、光镜观察移植后血管内膜增生病理情况。光镜下见假手术组正常静脉内膜为单层内皮细胞,中膜薄,由2- 3层血管平滑肌细胞及少量胶原组成。移植后3d可见内膜受损,有炎性细胞浸润。移植后7d可见内膜明显增生,在14d和28d时,可见内膜逐渐增厚,有较多的平滑肌细胞,血管管腔相对变小。3、动态观察移植后血管PKC-αmRNA、蛋白表达的变化。3.1 Real-Time PCR法检测移植静脉PKC-αmRNA表达:在移植后的第3天,mRNA的相对表达量明显升高,约为对照组的( 2.335士0.059 )倍, 2组间差别有统计学意义(P< 0. 01)。随着时间的延长,其表达量渐减少。3.2 Western Blot法检测移植静脉PKC-α蛋白表达:PKC-α表达在移植后第3天时明显增高,而后渐下降。3.3 SP免疫组织化学染色法检测移植静脉PKC-α蛋白:表达阳性细胞大部分位于增厚的中膜和内膜,增生组织中表达阳性细胞数明显高于非增生部分,且增生细胞胞质中棕黄颗粒也明显增多。结论:成功建立了兔颈部自体静脉移植模型;光镜下观察到移植后静脉内膜受损、增生,随着时间的延长,血管管腔相对变小;在静脉移植后的早期, PKC-αmRNA及其蛋白表达升高,而后渐降至正常,其表达定位于增生的平滑肌细胞中。这表明PKC-α可能参与了血管平滑肌增生的初始过程的信号转导。