【摘 要】
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心血管类疾病已经成为世界范围内引起残疾和死亡的主要原因之一,目前降低其死亡率是刻不容缓的事情。而多能干细胞(pluripotent stem cells,PSCs)给心血管疾病的治疗带来了曙光,由其分化而来的心肌细胞可以用于细胞治疗、疾病模型的建立和药物筛选,在心血管领域发挥着越来越重要的作用。但多能干细胞来源心肌细胞(Pluripotent stem cell-derived cardiomyo
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心血管类疾病已经成为世界范围内引起残疾和死亡的主要原因之一,目前降低其死亡率是刻不容缓的事情。而多能干细胞(pluripotent stem cells,PSCs)给心血管疾病的治疗带来了曙光,由其分化而来的心肌细胞可以用于细胞治疗、疾病模型的建立和药物筛选,在心血管领域发挥着越来越重要的作用。但多能干细胞来源心肌细胞(Pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes,PSC-CMs)的成熟度较低,限制了其在临床治疗和药物开发中的应用。自噬(Autophagy)是生命科学领域热门研究方向之一,其能够清除受损和衰老的细胞器以及发生变性的蛋白和核酸等物质,在心脏发育和心脏稳态的维持中具有很重要的作用,但自噬在心肌细胞成熟过程中的作用仍然缺乏研究,其中线粒体自噬(Mitophagy)可以将不成熟的或受损的线粒体清除掉,而线粒体质量控制对心肌细胞的成熟至关重要。本研究拟利用Earle’s平衡盐溶液(Earle’s Balanced Salt Solution,EBSS)处理多能干细胞来源的心肌细胞,通过给心肌细胞造成饥饿来增强心肌细胞内的自噬过程,阐明其对心肌细胞成熟的影响。本研究结果表明,EBSS处理可有效激活PSC-CMs的自噬过程。在自噬处理后,与对照组相比,PSC-CMs的多核率和细胞面积明显增加,并且结构相关基因TTN N2B、TNNI1以及TNNI3等表达与对照组相比明显增加,这些都表明心肌细胞结构变得更加成熟。同时,我们也利用膜片钳技术对自噬处理后心肌细胞的动作电位情况进行了检测,发现自噬处理后的心肌细胞动作电位明显提高,主要表现为在动作电位复极化90%时(Action potential duration at 90%repolarization,APD90)和动作电位复极化 50%时的持续时间(Action potential duration at 5 0%repolarization,APD5 0)明显延长,表明自噬处理后心肌细胞的电生理变得更加成熟。此外,自噬处理后可显著提高PSC-CMs的线粒体含量和功能,主要体现在线粒体拷贝数增加、线粒体融合、线粒体分裂以及线粒体自噬水平的提高。而细胞内受损的线粒体可以通过线粒体自噬清除掉,进而维持线粒体正常的生命活动。线粒体的功能和心肌细胞的代谢方式息息相关,由此我们检测了自噬后心肌细胞的代谢能力,发现自噬处理并不影响PSC-CMs的糖酵解能力,但明显增强其氧化磷酸化能力。以上研究结果表明,EBSS诱导的自噬可显著促进多能干细胞来源心肌细胞的结构,电生理和代谢的成熟。本研究为调控多能干细胞来源心肌细胞的成熟提供了新的思路。
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