基于自噬途径探讨当归饮子缓解荨麻疹样病变小鼠过敏反应的效应机制

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目的:本实验运用腹腔注射卵白蛋白和氢氧化铝悬液混合物的方法建立荨麻疹样病变小鼠模型,以期观察当归饮子对荨麻疹病变小鼠模型过敏反应的改善以及对自噬机制的干预。方法:选用SPF级BALB/c小鼠60只,设立分组,每组10只,并灌胃给药:空白组(生理盐水20m L·kg-1·d-1),模型组(生理盐水20m L·kg-1·d-1),开瑞坦组(0.0013g·kg-1·d-1),当归饮子高剂量组(39.3g·kg-1·d-1)、中剂量组(19.6g·kg-1·d-1)、低剂量组(9.8g·kg-1·d-1)。连续灌胃治疗21日。第22日腹腔注射2%水合氯醛(20ul/g)麻醉,取背部皮肤组织,处死小鼠。观察并记录小鼠精神状态、皮毛、饮食、大小便情况、体重变化和死亡情况,并按照全身致敏性评价标准,进行小鼠过敏反应强度评分。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠背部皮肤组织病理学改变;透射电镜观察皮肤组织细胞的超微结构变化和自噬小体生成水平;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测皮肤组织中自噬相关基因(ATG5)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)和泛素结合蛋白p62(p62)m RNA转录水平,运用2-△△Ct法计算基因相对表达量;免疫组化法(IHC)检测皮肤组织中ATG5、LC3B、p62的蛋白表达,运用image pro plus6.0图像分析处理软件测算累积光密度均值(IOD)表达评分。所有计量资料以SPSS 23.0进行数据统计分析。结果:与空白组比较,模型组小鼠皮肤组织表现出明显的荨麻疹样病理变化;当归饮子可显著改善荨麻疹样病变小鼠皮肤真皮水肿、胶原束分离、毛细血管扩张等病理表现。与空白组比较,模型组小鼠皮肤组织细胞超微结构破坏,胞质中自噬小体有一定程度表达;当归饮子可改善细胞核染色质浓聚、线粒体肿大、内质网离散等异常细胞超微结构,进一步促进自噬小体生成。与空白组比较,模型组小鼠皮肤组织中ATG5蛋白表达有一定程度升高;LC3Bm RNA水平有所升高,LC3B蛋白表达评分显著上升(P<0.01);与模型组比较,当归饮子能显著上调小鼠皮肤组织ATG5和LC3B的m RNA水平及蛋白表达水平,均显著升高(P<0.01或P<0.05),以高剂量组疗效最佳;与空白组比较,模型组小鼠皮肤组织中p62 m RNA水平及蛋白表达评分显著降低(P<0.01,P<0.01);与模型组比较,当归饮子能进一步显著下调小鼠皮肤组织的p62 m RNA水平及蛋白表达评分(P<0.05,P<0.01),同样以高剂量组疗效最佳。结论:1.腹腔注射卵白蛋白和氢氧化铝悬液混合物复制荨麻疹样病变小鼠模型成功;2.当归饮子可显著降低模型小鼠的过敏反应评分,改善小鼠皮肤的荨麻疹样病理表现;3.当归饮子可进一步上调皮肤组织中自噬小体的数量水平,同时改善上皮细胞的异常超微结构;4.当归饮子通过上调ATG5、LC3B的m RNA水平及蛋白表达,同时下调p62m RNA水平及蛋白表达,激活皮肤组织的自噬机制,控制过敏反应,维持细胞内环境稳态;综上所致,当归饮子可能通过增强细胞自噬水平,从而改善荨麻疹样病变小鼠皮肤组织的病理状态。
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