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本文提出了利用特定序列的DNAzymes和表面增强拉曼散射技术相结合的方法,从而实现了不同环境中的铅离子的特异性强、灵敏度高的检测。论文工作主要包含以下几个部分:一是利用计算机模拟软件设计出特定的DNA序列;二是采用纳米金粒子作为载体,并将修饰有拉曼信号分子的罗丹明DNA通过金硫金属键固定在金纳米粒子上,从而制备纳米金生物条码;三是通过杂交链式反应将纳米金生物条码集合在一起实现源头拉曼信号放大,利用磁珠作为基底也大大降低了背景信号,并且检测时间为2h。进一步对实验环境所需条件分别进行了优化,包括发卡DNA(H1)的碱基互补配对个数、发卡DNA(H1)接在磁珠上的浓度、磷酸盐缓冲(PBS)溶液的pH、杂交链式的反应时间、反应体系所处的反应温度。本文构建了新颖的基于DNAzymes的SERS信号放大技术检测实际样品中的铅离子的方法。设计了可以特异性识别铅离子的DNAzymes,通过杂交链式反应进一步增强拉曼信号。其原理是:当目标离子铅离子存在时,铅离子适体DNA链(A1)会与铅离子迅速的结合并形成新型的复合物,这种新型的配合物的形成催化了底物链上的DNAzymes,进而DNAzymes被催化剪切,由于热不稳定性,DNA S1链被释放到体系中,作为引发链进入到循环体系中。由于S1与体系中的发卡结构H1DNA链可以发生碱基互补配对,因此,可引发发卡DNA支持的循环放大反应,发卡结构H1DNA链的发卡结构被打开,从而暴露出H1 DNA链的茎部。由于H2的环部和H1茎部互补配对,发卡结构H2 DNA链的发卡结构被打开,由于H3的环部和H2茎部互补配对,这样一次交替发生碱基互补配对反应,类似一种聚合反应,把大量的发卡固定在一起,从而引发杂交链式反应,由于生物条码捕获探针与发卡结构H2、H3茎部的尾部互补,因此带有信号探针的纳米金生物条码被固定到磁珠上。最终实现了在不同环境中的铅离子的特异性强、灵敏度高的检测。线性范围为1.0×10-13 M-1.0×10-7 M,检测限达到70 fM。构建的基于DNAzymes的SERS信号放大技术应用于不同环境中铅离子的检测,包括5%的自来水样本、1%人类血清的环境,在10 nM和100 nM两个不同浓度水平上,回收率从92%到96%,而在标准溶液里回收率是从98%到102%,这种变化范围是可接受的,并且平均相对标准偏差不超过7%。因此,本文设计的简单新颖的基于DNAzyme的放大方法可以高灵敏的实现铅离子的检测。