【摘 要】
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目的脑缺血具有高发生率、高致残率和高致死率。促进脑缺血后血管新生,可帮助恢复局部缺血脑组织的血液供应,有益于神经功能的恢复及脑的功能重塑,对减轻脑缺血损伤有重要意义。本实验目的在于评价天麻素、薯蓣皂苷元及其组合物对脑缺血损伤的保护作用,并研究药物对脑缺血发生后血管新生的影响及其作用机制,以期为后续脑缺血防治药物的研究提供实验依据。方法1.原代培养大鼠脑微血管内皮细胞（Brain microvasc
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目的脑缺血具有高发生率、高致残率和高致死率。促进脑缺血后血管新生,可帮助恢复局部缺血脑组织的血液供应,有益于神经功能的恢复及脑的功能重塑,对减轻脑缺血损伤有重要意义。本实验目的在于评价天麻素、薯蓣皂苷元及其组合物对脑缺血损伤的保护作用,并研究药物对脑缺血发生后血管新生的影响及其作用机制,以期为后续脑缺血防治药物的研究提供实验依据。方法1.原代培养大鼠脑微血管内皮细胞（Brain microvascular endothelial cells,BMECs）,通过免疫荧光法对细胞进行鉴定,通过氧糖剥夺法建立BMECs缺氧损伤模型,使用天麻素、薯蓣皂苷元及其组合物对缺氧损伤BMECs进行药物干预,CCK-8法检测BMECs的细胞活力,检测LDH漏出率、IL-1β含量、SOD 活力、MDA 浓度,观察 Hoechst 33258、FITC-Annexin V/PI 染色,考察药物对BMECs缺氧损伤的保护作用。2.使用新型胸腺嘧啶脱氧核苷类似物5-乙炔基-2’-脱氧尿苷标记新生BMECs,观察单个细胞增殖情况,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,小管形成实验检测细胞血管形成能力,考察天麻素、薯蓣皂苷元及其组合物在促进血管新生方面的作用。3.利用网络药理学和分子对接技术,重点关注血管新生方面,研究天麻素、薯蓣皂苷元对抗脑缺血的作用机制。结果1.天麻素、薯蓣皂苷元及其组合物可提高正常及缺氧损伤BMECs细胞活力,具有抗炎、抗氧化和抗细胞凋亡活性,具有保护缺氧损伤BMECs作用。2.天麻素、薯蓣皂苷元及两者组合物可促进原代BMECs的增殖、侵袭、迁移以及小管形成,表明在细胞水平上,天麻素、薯蓣皂苷元及两者组合物具有一定程度的促进血管新生作用。3.天麻素与CASP3、PPARG、F2、MMP9、AKT1蛋白具有良好的结合活性,薯蓣皂苷元与NOS3、KDR蛋白具有良好的结合活性,天麻素、薯蓣皂苷元可能主要通过VEGF信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路以及HIF-1信号通路,调控脑缺血后血管新生,从而对缺氧损伤BMECs发挥保护作用。结论天麻素、薯蓣皂苷元及其组合物具有抗脑缺血作用,其作用机制可能跟药物作用于AKT1、NOS3、VEGFR2等蛋白,调控VEGF/Akt/MAPK等信号通路,促进血管新生有关。
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