【摘 要】
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目的:探究双硫仑联合铜离子（DSF/Cu）的抗肺癌免疫活性及其对肺癌及结肠癌细胞免疫原性死亡的影响,为DSF/Cu在治疗肺癌和结肠癌方面的应用提供实验依据。研究方法:（1）采用0.05μM～1.6μM的DSF/Cu处理人肺癌细胞株NCI-H460和A549细胞,通过MTT法、Western blot、流式细胞术分别检测肿瘤细胞的细胞毒性、凋亡及免疫原性相关分子CRT、HSP70、HSP90和MHC
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目的:探究双硫仑联合铜离子（DSF/Cu）的抗肺癌免疫活性及其对肺癌及结肠癌细胞免疫原性死亡的影响,为DSF/Cu在治疗肺癌和结肠癌方面的应用提供实验依据。研究方法:（1）采用0.05μM～1.6μM的DSF/Cu处理人肺癌细胞株NCI-H460和A549细胞,通过MTT法、Western blot、流式细胞术分别检测肿瘤细胞的细胞毒性、凋亡及免疫原性相关分子CRT、HSP70、HSP90和MHC-Ⅰ的表达情况。（2）构建小鼠肺癌皮下移植瘤动物模型,将小鼠随机分为五组:生理盐水组、低剂量（50 mg/kg）DSF/Cu、中剂量（75 mg/kg）DSF/Cu、高剂量（100 mg/kg）DSF/Cu和阳性对照组,观察DSF/Cu对肺癌移植瘤小鼠的体重及肿瘤生长变化等情况,通过免疫荧光和流式细胞术分别检测DSF/Cu对肺癌组织ICD相关分子CRT、HSP70表达、T细胞的分群以及T细胞释放细胞因子的情况。（3）采用0.05μM～1.6μM的DSF/Cu处理人结肠癌细胞株HCT-8、SW620和HCT-116细胞,通过MTT法、流式细胞术分别检测肿瘤细胞的细胞毒性、凋亡及免疫原性相关分子CRT和HSP70的表达情况。（4）构建小鼠结肠癌皮下移植瘤动物模型,将小鼠随机分为五组:生理盐水组、低剂量（50 mg/kg）DSF/Cu、中剂量（75 mg/kg）DSF/Cu、高剂量（100 mg/kg）DSF/Cu和阳性对照组,观察DSF/Cu对结肠癌移植瘤小鼠的体重及肿瘤生长变化等情况,通过流式细胞术检测DSF/Cu对结肠癌组织ICD相关分子CRT、HSP70表达的情况。结果:（1）DSF/Cu处理人肺癌细胞株NCI-H460和A549细胞48 h后,细胞活力逐渐降低,半数抑制率IC50分别为0.44μM和0.38μM;凋亡率明显升高（P<0.05）,凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9表达上调,Bax/Bcl-2比值较对照组升高（P<0.05）,肺癌细胞表面CRT、HSP70、HSP90和MHC-Ⅰ分子的表达升高（P<0.05）。（2）肺癌移植瘤实验表明,DSF/Cu治疗组小鼠体重无明显变化,肿瘤的生长速度减慢,肿瘤体积较对照组明显减小（P<0.05）,荷瘤小鼠的总生存期显著增加;免疫荧光和流式细胞术结果均显示实体瘤组织中CRT、HSP70表达升高（P<0.05）;DSF/Cu治疗组小鼠肿瘤组织CD4+和CD8+T细胞的比例以及CD4+和CD8+T细胞释放IFN-γ的水平显著性上升（P<0.05）。（3）DSF/Cu处理人结肠癌细胞株HCT-8、SW620和HCT-116细胞48 h后,细胞活力逐渐降低,半数抑制率IC50分别为0.307μM、0.295μM和0.271μM;凋亡率明显升高（P<0.05）,结肠癌细胞表面CRT、HSP70的表达上调（P<0.05）。（4）结肠癌移植瘤实验表明,DSF/Cu治疗组小鼠体重无明显变化,肿瘤的生长速度减慢,肿瘤体积较对照组明显减小（P<0.01）;流式细胞术结果显示实体瘤组织中CRT、HSP70表达升高（P<0.05）。结论:DSF/Cu能诱导肺癌和结肠癌发生免疫原性死亡,其机制可能是通过促进肿瘤细胞凋亡、提高CRT、HSP70、HSP90和MHC-Ⅰ等分子的表达,并通过靶向NPL4以及增强T淋巴细胞免疫及IFN-γ表达来实现的。
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