【摘 要】
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背景及目的:肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis,RIF）是各类慢性肾病进展到终末期的共同病理改变。尤其以肾间质成纤维细胞及胶原聚集增多为主要特征。但目前临床上对肾脏纤维化尚无较好的治疗方法且其具体的发生发展机制还有待阐明。研究表明巨噬细胞的大量浸润及其分泌的细胞因子在肾纤维化进程中有重要作用。而在肾纤维化进程中肾小管上皮细胞也可通过转分化机制转变成肌成纤维细胞,参
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背景及目的:肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis,RIF）是各类慢性肾病进展到终末期的共同病理改变。尤其以肾间质成纤维细胞及胶原聚集增多为主要特征。但目前临床上对肾脏纤维化尚无较好的治疗方法且其具体的发生发展机制还有待阐明。研究表明巨噬细胞的大量浸润及其分泌的细胞因子在肾纤维化进程中有重要作用。而在肾纤维化进程中肾小管上皮细胞也可通过转分化机制转变成肌成纤维细胞,参与肾纤维化的进程。Act1是Nuclear factor kappa-B（NF-κB）信号途径活化的适配器蛋白参与调控巨噬细胞功能。我们前期研究初步证实巨噬细胞Act1下调减轻肾纤维化病变。但是否巨噬细胞Act 1通过调控肾小管上皮细胞转分化作用改善肾纤维化尚未见报道。因此,本课题旨在进一步探究巨噬细胞Act1下调对肾小管上皮细胞间充质转化的作用和分子机制。方法:1.随机选取8周龄雄性Wild Type（WT）和巨噬细胞Act1表达下调的小鼠（Act1小鼠）,通过结扎单侧输尿管建立肾纤维化模型（UUO模型）;2.利用Masson染色、免疫组化α-SMA、F4/80以及CD3等指标进一步明确肾纤维化程度与巨噬细胞浸润的相关性;3.免疫荧光观察巨噬细胞转变成肌成纤维细胞以及肾小管上皮细胞间充质转分化情况;4.体外利用TGFβ1诱导肾小管上皮细胞（TCMK1）,建立体外上皮细胞间充质转分化模型;5.利用Transwell小室观察TGFβ1诱导的巨噬细胞迁移作用;6.通过巨噬细胞与肾小管上皮细胞株共培养体系,结合Western Blot检测以明确巨噬细胞Act1下调是否能影响TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化作用;7.进一步RNA-seq转录组测序分析共培养体系中的两种巨噬细胞m RNA差异表达并进行q RT-PCR验证;8.根据生物信息学分析和Western Blot明确是否两种巨噬细胞通过分泌差异蛋白调控TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化关键信号途径。结果:（1）巨噬细胞Act1下调后UUO模型肾间质组织中巨噬细胞浸润减少;（2）巨噬细胞Act1下调后UUO模型肾间质组织中巨噬细胞与肌成纤维细胞共定位数目减少;（3）巨噬细胞Act1下调抑制TGFβ1诱导的巨噬细胞向肌成纤维细胞转化;（4）巨噬细胞Act1下调抑制TGFβ1诱导的巨噬细胞迁移;（5）巨噬细胞Act1下调抑制TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化;（6）巨噬细胞Act1下调抑制TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化JAK-STAT3关键信号蛋白的表达和磷酸化。结论:巨噬细胞Act1下调可能通过抑制巨噬细胞迁移以及肾小管上皮细胞转分化作用而改善肾纤维化损伤。
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