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目的:棕榈酰化跨膜衔接蛋白SCIMP是一种SLP衔接子和C末端Src激酶相互作用的膜蛋白,特异性表达于B细胞以及APC中,在免疫反应中发挥重要作用。本文旨在探讨干扰Kupffer细胞(KCs)SCIMP对诱导大鼠原位肝移植术免疫耐受微环境的形成以及相关机制的研究。方法:1.建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,WB、免疫组化以及免疫荧光检测肝移植术后SCIMP的表达定位。向模型大鼠门静脉注入抗SCIMP mAb(0.35mg/只),对照组注入同等的Control mAb,测定血清肝功以及肝组织病理变化。接着,将模型大鼠随机分为:SCIMP-siRNA大组:SHAM组,大鼠开腹手术暴露门静脉,并经门静脉注入甘露糖共轭聚合物包裹的SCIMP-siRNA(2mg/kg,3天/次,连续2周);LT组,大鼠原位肝移植手术,并经门静脉注入甘露糖共轭聚合物包裹的SCIMP-siRNA(2mg/kg,3天/次,连续2周);Control大组:SHAM组,大鼠开腹手术暴露门静脉,并经门静脉注入同等剂量甘露糖共轭聚合物包裹的Control-siRNA;LT组,大鼠原位肝移植手术,并经门静脉注入同等剂量甘露糖共轭聚合物包裹的Control-siRNA。术后WB检测各组肝移植术后SCIMP的表达;HE检测大鼠肝组织病理变化,并进行排斥反应活动评分;提取KCs,FCM检测大鼠CD80(+)MHCII(+)KCs数量的变化。2.分离野生型大鼠移植术后的KCs,免疫疫光以及免疫共沉淀检测SCIMP与MHC II的关系。提取上述各组KCs与初始T细胞进行共培养,CFSE以及EdU检测KCs对T细胞增殖分化的影响。接着提取野生大鼠KCs,将细胞实验分为两组:Scramble组,KCs转染错意序列,慢病毒对照组;SCIMP-shRNA组,KCs转染shRNA-SCIMP慢病毒组。100ng/mL LPS在1h、6h、12h、24h、36h、48h处理上述各组。WB检测TLR4、MyD88、p-TAK1、p-MMK、p-p38、p-JNK、p-p65、JAK3、JAK1、p-STAT6、PPARγ、Bid、Bax、Cleaved-Caspase3、Bcl2蛋白水平的变化;ELISA检测炎症因子IL-6、IL-10、IL-12以及氧化产物H2O2的变化;RT-PCR检测细胞内M2标志物Arg1、Retnla以及吞噬凋亡Tim-4、Mfge8、Mertk、CD36、Gas6、Scarf mRNAs水平的变化;FCM检测大鼠CD204(+)CD206(+)KCs数量的变化;TUNEL检测KCs的凋亡;噬菌实验检测各组KCs对凋亡T细胞的吞噬能力;予以JAK3阻断剂(PF-06651600)/STAT6阻断剂(As1517499)后,WB检测JAK3、p-STAT6、PPARγ、CD206、Tim-4、Mfge8、Gas6蛋白水平表达。3.动物实验中,按照方法1中的分组建立大鼠模型,术后TUNEL检测肝组织的凋亡情况;检测大鼠外周血清ALT、AST水平的变化;免疫组化检测肝组织HGF表达水平;余下各组大鼠作为观察生存期之用,观察期以大鼠死亡为终点,并做Log-Rank生存资料分析。结果:1.在动物实验中,随着时间推移SCIMP表达逐渐升高,且在术后9d达到高峰,且SCIMP特异性的表达于KCs。阻断SCIMP功能后,SCIMP mAb组大鼠血清肝功能逐渐恢复正常水平,且肝组织病理改变接近正常肝脏,然而Control mAb组大鼠表现出了急性排斥反应。与LT对照组比较,干扰KCs SCIMP后,促炎因子IL-6、IL-12在SCIMP-siRNA组表达接近正常水平,抑炎因子IL-10水平明显升高,且肝组织病理变化接近正常,SCIMP-siRNA组大鼠均为非确定性排斥反应,差异具有明显的统计学意义(P<0.05)。MHC II(+)CD80(+)双阳性KCs数量在干扰KCs SCIMP后明显减少。2.在细胞实验中,免疫荧光示MHC II和SCIMP均表达于KCs细胞膜。免疫共沉淀进一步证实,SCIMP与MHC II有相互作用;干扰KCs SCIMP能够明显抑制T细胞的增殖;干扰SCIMP抑制了TLR4/NFκB/MAPK蛋白的表达,促炎因子IL-6、IL-12减少,抗炎因子IL-10增多,与对照组比较差异具有明显统计学意义(P<0.05);干扰KCs SCIMP后JAK3、p-STAT6、PPARγ表达增高,而JAK1的表达未见明显变化,并且随着时间推移活化的KCs向M2型极化的数量逐渐增多,KCs对凋亡T细胞的吞噬清除能力增强,凋亡清除相关桥接分子Tim-4、Mfge8、Gas6的转录与表达增高,与对照组比较差异具有明显统计学意义(P<0.05);予以JAK以及STAT6阻断剂验证了抑制KCs SCIMP可通过JAK3/STAT6/PPARγ通路增强KCs清除凋亡细胞的能力。3.在动物实验中发现肝移植术后肝细胞凋亡明显增加,然而SCIMP-siRNA组肝脏凋亡细胞与对照组比无明显差异,并且肝功能恢复到基本正常的水平。同时,SCIMP-siRNA组肝细胞生长因子(HGF)水平升高,SCIMP-siRNA组大鼠生存时间明显延长,且基本都超过了100d,与LT对照组比较差异具有明显统计学意义(P<0.05)。结论:肝移植术后KCs SCIMP表达增加,并且SCIMP与MHCII功能呈正相关;干扰KCs SCIMP通过抑制TLR4/NFκB/MAPK以及激活JAK3/STAT6/PPARγ促进KCs向免疫耐受的M2型极化,减少炎症因子释放,促进KCs清除凋亡T细胞的能力,改善肝组织病理改变,并且延长了大鼠肝移植术后的生存时间,有利于免疫耐受微环境的形成。