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目的:CTNNB1基因突变与原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism,PA)患者的临床表型存在密切关联,含有CTNNB1突变基因的醛固酮腺瘤(aldosterone producing adenomas,APA)瘤体组织比含有KCNJ5突变基因的瘤体直径更大,CYP11B2表达量更高,提示Wnt/β-catenin信号通路可能在APA形成及醛固酮分泌中起重要作用。故本研究拟通过细胞水平实验探究CTNNB1基因对肾上腺皮质腺癌H295R细胞增殖及醛固酮分泌的影响,为探索APA可能的发病机制提供一定的基础。方法:利用RNAi技术,以pGLMV-SC5 RNAi慢病毒为载体,靶向沉默CTNNB1基因。实验分为4组:空载组(Control组)、CTNNB1基因(β-catenin)沉默组(si-β-catenin组)、加入血管紧张素Ⅱ刺激的空载组(Control+Ang Ⅱ组)和加入血管紧张素Ⅱ刺激的CTNNB1基因(β-catenin)沉默组(si-β-catenin+Ang Ⅱ组)。用倒置显微镜及荧光显微镜观察各组细胞生长及荧光表达情况,利用q RT-PCR以及Western blot检测各组H295R细胞CYP11B2、CYP11B1、AXIN2、LEF1以及Cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平;利用ELISA检测各组细胞上清液中醛固酮的表达量;利用CCK-8和细胞克隆形成实验检测各组细胞增殖能力。收集、整理实验数据,用SPSS13.0进行统计学分析。结果:靶向沉默CTNNB1基因成功下调肾上腺皮质腺癌H295R细胞β-catenin的表达。与空载组相比,CTNNB1基因沉默组中β-catenin的mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.001)。与Control组相比,si-β-catenin组的AXIN2和LEF1的mRNA表达水平明显下降(P<0.01);Western blot结果显示si-β-catenin组的AXIN2和LEF1的蛋白水平也显著下降。与Control+Ang Ⅱ组相比,si-β-catenin+Ang Ⅱ组的AXIN2和LEF1的表达量进一步下降,提示靶向沉默CTNNB1基因使Wnt/β-catenin信号通路活性降低。与Control组相比,si-β-catenin组的CYP11B2 mRNA表达量降低(P<0.001),在血管紧张素Ⅱ刺激下,Control+Ang Ⅱ组的CYP11B2 mRNA表达量明显高于si-β-catenin+Ang Ⅱ组(P<0.001),但Control组与si-β-catenin组的CYP11B1 mRNA表达量无明显差异(P>0.05),加入血管紧张素Ⅱ刺激后,Control+Ang Ⅱ组与si-β-catenin+Ang Ⅱ组的CYP11B1mRNA表达量均增加,但两组之间仍无明显差异(P>0.05);Western blot结果显示沉默CTNNB1基因可显著降低CYP11B2的表达,但对CYP11B1的表达无明显影响。各组H295R细胞上清液中醛固酮表达量显示,Control组:51.477±1.977 ng/ml,si-β-catenin组:48.830±1.557 ng/ml,Control+Ang Ⅱ组:80.938±3.092ng/ml,si-β-catenin+Ang Ⅱ组:56.161±2.725 ng/ml。与Control组相比,si-β-catenin组上清液中醛固酮的表达量下降12.91%(P<0.05);在血管紧张素Ⅱ刺激下,si-β-catenin+Ang Ⅱ组的醛固酮表达量相较于Control+Ang Ⅱ组下降30.61%(P<0.001)。Cyclin D1是调控细胞周期,影响细胞增殖的关键蛋白,本研究测定各组Cyclin D1的mRNA及蛋白表达水平显示,si-β-catenin组的Cyclin D1 mRNA表达水平明显低于Control组(P<0.01),加入血管紧张素Ⅱ刺激后,Control+Ang Ⅱ组与Control组的Cyclin D1 mRNA表达水平无明显差异(P>0.05),si-β-catenin+Ang Ⅱ组的Cyclin D1 mRNA表达水平比Control+Ang Ⅱ组明显降低(P<0.01);Western blot结果显示沉默CTNNB1基因可显著降低Cyclin D1的蛋白表达水平。CCK-8增殖实验结果显示,si-β-catenin组细胞增殖能力明显低于Control组(P<0.01);细胞克隆形成实验显示,si-β-catenin组细胞克隆数明显少于Control组(P<0.01)。结论:β-catenin是Wnt通路的核心分子,靶向沉默CTNNB1基因使β-catenin合成减少,Wnt/β-catenin信号通路活性降低。靶向沉默CTNNB1基因可显著降低H295R细胞CYP11B2的表达,减少醛固酮分泌,降低H295R细胞对血管紧张素Ⅱ的反应性,但是对CYP11B1的表达无明显影响。靶向沉默CTNNB1基因可降低β-catenin依赖性LEF/TCF的转录活性,减少下游细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,从而阻碍细胞从G1期进入S期,最终抑制H295R细胞的增殖。