本文针对济南诺能生物工程有限公司生产的中性蛋白酶的发酵液提取分离工艺进行了研究,通过本研究可工业化生产食品级固体中性蛋白酶。首先对中性蛋白酶酸碱稳定性、热稳定性进行了检测。中性蛋白酶发酵液用乙酸-乙酸钠调整pH4.80-5.20范围内较稳定,加入0.2%的山梨酸钾,可在一定时间内抑制杂菌的生长,加入0.1%无水氯化钙,可以增强中性蛋白酶活力和稳定性。以公司现有发酵能力,发酵液的处理选用隔膜压滤机板框过滤,过滤面积为150㎡,过滤压力为0.6MPa,选择添加3%玉米淀粉作为助滤剂,0.3%聚丙烯酰胺作为絮凝剂,滤饼顶水量为发酵液体积的10%。中性蛋白酶板框过滤液超滤机选用管式超滤机,整个过程确保温度低于25℃,选用截留分子量为10 000Da的聚丙烯腈膜,压力控制为0.4MPa左右,超滤结束后,液体中性蛋白酶活为初始酶活力的6.7倍左右,收率高于95%。盐析过程中,硫酸铵添加量为中性蛋白酶浓缩液质量的25%左右,滤饼酶活力约为760 000u/g,盐析收率高于95%;选用加水超滤的方法来洗脱盐析滤饼中的硫酸铵,除去硫酸铵后液体酶活力约为230 000u/g,固含量为18.2%。选用压力式喷雾干燥塔,进风温度为138℃,出风温度为76℃,旋流片3.9,喷孔1.5,进料速度为200L/h。所得粉末中性蛋白酶60目标准筛通过率90%以上,总收率约为85%,酶活力1 100 000u/g,酶活力为发酵液酶活力的73倍。目标产品卫生指标和理化指标均符合食品级酶制剂的要求。