论文部分内容阅读
目的:收集初诊患者骨髓样本,进行血常规分析、染色体核型分析和流式细胞术髓系相关抗原检测,将确诊为急性髓系白血病的骨髓样本进行WT1基因检测和融合基因检测。通过分析急性髓系白血病患者WT1基因和融合基因的表达特点,两种类型的基因表达水平的相关性,判断二者之间联合检测的可行性,为WT1基因和融合基因在急性髓系白血病微小残留病灶中的联合应用提供参考意见,以实现为急性髓系白血病微小残留病灶监测提供更优的微小残留病灶监测指标的研究目的。方法:收集2017年7月至2021年6月在哈尔滨医科大学附属第一医院血液内科初次就诊的白血病患者805例,经血常规分析、染色体核型分析和多参数流式细胞术检查,综合细胞形态学结果和患者临床表现,筛选出确诊为急性髓系白血病患者261例,提取患者的骨髓液中的单个核细胞,并完成RNA样本提取。采用实时荧光定量PCR的方法,对每个样本进行WT1基因定量检测、融合基因定性检测及融合基因定量检测。将WT1基因表达比例大于0.55%的患者归到融合基因阳性组,表达比例小于等于0.55%的患者归到融合基因阴性组。将融合基因定性检测结果为阴性的患者归到融合基因阴性组,结果为阳性的归到融合基因阳性组。再根据融合基因定量结果,将融合基因表达比例大于等于64.82%的患者归到融合基因高表达组,比例低于64.82%的患者归到融合基因低表达组。计算融合基因和WT1基因各自的检出率,比较融合基因检出率、WT1基因检出率与融合基因联合WT1基因的检出率的差异。比较各组之间WT1基因表达水平的差异性,判断WT1基因的表达特异性。分析WT1基因与各类融合基因表达水平的相关性,判断WT1基因与融合基因之间的表达关系。在融合基因高表达组与低表达组间,比较融合基因表达水平与WT1基因表达水平的差异性。结果:收集到初诊的急性髓系白血病患者285例,经RNA提取后质量检测合格的样本261例。采用实时荧光定量PCR的方法检测,融合基因检测的阳性率为54.79%,WT1基因检测的阳性率为92.34%,融合基因联合WT1基因检测,阳性率为97.32%,检出率显著提升。WT1基因表达水平在急性髓系白血病M1、M2、M3、M4和M5组间无显著性差异,在融合基因阳性组与阴性组间无差异。在CBFβ-MYH11组、RUNX1-RUNX1T1组、PMLRARα组三组间,WT1基因表达水平有统计学差异,且WT1基因表达水平与RUNX1-RUNX1T1融合基因表达水平有一定的相关性。在融合基因高表达组和低表达组中比较WT1基因表达水平与融合基因表达水平,发现在融合基因高表达组,WT1基因表达比例低于融合基因表达比例,在低表达组中,WT1基因表达水平高于融合基因表达水平。结论:融合基因联合WT1基因检测,能够提升AML患者的分子检出率和检测灵敏度,可以做为急性髓系白血病患者MRD监测指标。