血管性痴呆是由于脑血管疾病和心血管病变的因为导致的获得性、持续性智能障碍综合征,是老年性痴呆中最常见的类型之一,仅次于AD。目前。VD的治疗主要针对供血不足、缺血半暗带的脑细胞,通过改善脑循环和脑细胞供氧预防新血栓形成与再梗死,常用的治疗药物有脑循环改善剂、脑能量代谢激活剂、促进胆碱能系统的药物,从治疗的角度来看,没有突破性进展。神经系统损伤后的恢复是一个多环节、多层面的系统整体调节过程。积极探索促进认知功能恢复的治疗策略,仍是基础医学和临床医学的一个重大课题。　　 川芎嗪是中药川芎的主要有效成分之一,具有清除氧自由基、钙拮抗、扩血管、抗血小板聚集和血栓形成等多种作用,广泛应用于临床治疗。但川芎嗪分子中的甲基易被氧化,生成极性和水溶性较大的代谢物而迅速被排出体外,所以川芎嗪存在半衰期短,生物利用度低等缺点。本课题选用的化合物川芎嗪二苯甲基哌嗪(TMPDP),是以氟桂利嗪的主要药效基团二苯甲基-1-哌嗪基甲基基团取代川芎嗪的药代基团2位甲基而合成出的新型川芎嗪烃基哌嗪类衍生物。氟桂利嗪为第2代哌嗪类钙拮抗药,能通过血脑屏障,选择性扩张血管,预防缺血、缺氧引起的细胞内Ca2+超载所致细胞损害,临床上广泛用于心脑血管疾病和外周血管功能不全的防治。以氟桂利嗪的活性基团取代川芎嗪分子的药代基团,以期克服川芎嗪体内半衰期短、生物利用度低等缺点,并通过协同作用增强药效,提高抗心脑血管疾病作用。　　 本论文的第一部分,在细胞水平采用体外细胞实验观察化合物对不同损伤机制造成的神经细胞损伤的保护作用；第二部分,在动物水平采用双侧颈总动脉结扎并降压的方法制作大鼠血管性痴呆模型观察化合物对血管性痴呆大鼠的保护作用,为进一步将TMPDP开发为具有自主知识产权的抗血管性痴呆药物提供理论和实验依据。　　 1 TMPDP对KCL损伤SH-SYSY细胞活力的影响　　 采用MTT法检测细胞活力。实验结果显示:SH-SY5Y细胞经KCL(240mmol·L-1)损伤后,细胞活力明显降低(P<0.01)。而同时给予TMPDP后,40,80μmol/L两个剂量组均可明显抑制KCL对神经细胞的损伤程度(P<0.05)。　　 2 TMPDP对L-Glu损伤SH-SY5Y细胞活力的影响　　 采用MTT法检测细胞活力。实验结果显示:SH-SY5Y细胞经L-Glu(3000μmol·L-1)后,细胞活力明显降低(P<0.01)。而同时给予TMPDP后,20,40gmol/L两个剂量组均可明显抑制Glu对神经细胞的损伤程度(P<0.01)。　　 3 TMPDP对NaN3损伤SH-SY5Y细胞活力的影响　　 采用MTT法检测细胞活力。实验结果显示:SH-SY5Y细胞经NaN3(64mmol·L-1)损伤后,细胞活力明显降低(P<0.01)。而同时给予TMPDP后,40,80gmol/L两个剂量组均可明显抑制NaN3对神经细胞的损伤程度(P<0.01)。　　 4 TMPDP对血管性痴呆模型大鼠行动能力的影响　　 采用低血压反复夹闭双侧颈总动脉4周造成血管性痴呆大鼠模型。前肢抓握实验是动物实验中常用的检查动物行动能力的实验方法。手术后第30日经行前肢抓握实验用以检测实验大鼠行动能力,并进行评分。结果表明:反复结扎双侧颈总动脉后,动物的行动能力有所降低,给予TMPDP治疗后,动物行动能力评分明显提高(P<0.05)。　　 5 TMPDP对血管性痴呆模型大鼠空间学习记忆能力的影响　　 本实验采用Morris水迷宫检测大鼠的空间记忆能力,包括定位航行实验和空间探索实验两项检测指标。在定位航行实验中,模型组大鼠测试成绩最差,逃避潜伏期比假手术组明显延长(P<0.01)；另外空间探索实验中,穿越平台次数和在平台所在象限停留时间均显著减少(P<0.01),表明双侧颈总动脉结扎造成大鼠脑慢性缺血,4周后模型大鼠已出现显著的学习记忆能力损害。给予80mg/kgTMPDP后,大鼠定位航行实验逃避潜伏期明显降低,空间探索实验中,穿越平台次数和在平台所在象限停留时间均显著增高(P<0.01)。　　 6 TMPDP对血管性痴呆模型大鼠脑内谷氨酸含量的影响　　 收集实验大鼠脑组织匀浆,用考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白量,按谷氨酸含量检测试剂盒说明书测定组织谷氨酸含量。实验结果表明:双侧颈总动脉反复结扎并降压后,大鼠脑组织匀浆中谷氨酸含量明显升高(P<0.01)。与模型组相比,20、80mg/kg TMPDP能够显著降低脑组织中谷氨酸含量(P<0.05)。　　 7 TMPDP对血管性痴呆模型大鼠脑内MDA、GSH含量和SOD活性的影响　　 收集实验大鼠脑组织匀浆,用考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白量,按MDA、GSH含量检测试剂盒说明书测定组织MDA、GSH含量,按SOD活性检测试剂盒说明书测定组织SOD活性。实验结果表明:双侧颈总动脉反复结扎并降压后,大鼠脑组织匀浆中MDA含量明显升高(P<0.01)；SOD活性和GSH含量明显降低(P<0.01)。与模型组相比,20、80mg&g TMPDP能够降低脑组织中MDA含量(P<0.01),80mg/kgTMPDP能够升高组织SOD活性和GSH含量(P<0.01)。　　 8 TMPDP对血管性痴呆模型大鼠脑内NO含量及NOS活性的影响　　 收集实验大鼠脑组织匀浆,用考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白量,按NO含量检测试剂盒说明书测定组织NO含量,按NOS活性检测试剂盒说明书测定组织NOS活性。实验结果表明:双侧颈总动脉反复结扎并降压4周后,大鼠脑组织匀浆中NO含量和NOS活性无显著变化(无统计学差异)。　　 9 TMPDP对血管性痴呆模型大鼠脑内线粒体的影响　　 线粒体悬液的浑浊度可反映线粒体肿胀度,其吸光度越高说明线粒体肿胀程度越高,线粒体损伤越严重。实验结果表明:双侧颈总动脉反复结扎并降压4周后,大鼠脑内线粒体肿胀度明显升高(P<0.01),说明双侧颈总动脉反复结扎并降压能损伤大鼠脑线粒体；给予20,80mg/kgTMPDP后,大鼠脑线粒体肿胀度显著降低(P<0.05)。