手性界面及手性聚合物对Muse细胞行为调控的研究

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再生医学专注于应用细胞修复损伤或失去功能的组织,Muse细胞在再生医学领域表现出巨大的应用前景。目前尚未有根本治疗方法的肌萎缩性侧索硬化症(ALS)以及中风后的脑梗和心肌梗死等疾病,在基于Muse细胞的细胞疗法的临床试验中取得意外成效。通过静脉注射的方式给药无需手术,并且同种异源的Muse细胞也不会引起免疫排斥,可在宿主组织区域保留很久。Muse细胞较低的增殖活性是目前急需解决的问题,本课题从手性对细胞行为调控的角度出发,研究材料手性对Muse细胞行为的影响。具体研究内容如下所示:(1)手性界面对Muse细胞行为的影响。通过层层自组装(Lb L)方法,将聚乙烯亚胺(PEI),氧化石墨烯(GO)和L/D-苯丙氨酸(L/D-PHE)交替沉积在基底,形成聚电解质手性界面PEI(GO-L/DPHE),静电相互作用和氢键是成膜驱动力。观察Muse细胞在不同手性界面的行为差异,Muse细胞在L膜上有最佳的生长状态,其初始的活细胞黏附量是D膜的1.05倍,并随着孵育时间增加,L膜、D膜上活细胞数目成比例增加且正比于初始的细胞黏附量。PEI(GO-L/DPHE)界面对牛血清白蛋白(BSA)的吸附表现出明显的差异,L膜的蛋白质吸附量明显多于D膜。(2)手性单体和手性聚合物的制备及表征。以手性苯丙氨酸和丙烯酰氯合成手性单体(NALPHE和NADPHE),通过自由基聚合进一步合成手性聚合物(Poly(NALPHE)和Poly(NADPHE))。核磁氢谱(~1H-NMR)和傅里叶变换红外(FT-IR)测试均证明手性单体和手性聚合物成功制备。圆二色(CD)光谱结果显示手性产物具有相反的旋光性,且手性聚合物的旋光活性比手性单体更高。凝胶渗透色谱仪(GPC)显示手性聚合物分子量相近。扫描电镜(SEM)和接触角测试表明,手性单体NALPHE和NADPHE之间的表面形貌类似,润湿性接近;聚合物Poly(NALPHE)和Poly(NADPHE)之间的表面形貌和润湿性也相近。(3)手性单体和手性聚合物对Muse细胞行为的影响。Muse细胞在手性聚合物培养液(50μg/m L)中共培养时,L培养液中细胞的初始黏附数量比D培养液中细胞数目多,并且L培养液中细胞增殖速度更快。培养至72小时时L培养液中细胞数目和D培养液中细胞数目具有显著的统计学差异,不但L培养液中活细胞数目更多,而且细胞的铺展面积也更大。孵育至第7天时Muse细胞的干性依然得到很好的维持,培养至21天时L培养液中的细胞成骨分化水平更高。
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