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目的: 研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人肠上皮细胞(humanintestinal epithelial cell，Caco-2) IL-8表达的作用，对于了解创伤弧菌所引发的粘膜屏障免疫有极为重要的意义，为创伤弧菌溶细胞素的细胞毒性机制提供一些实验依据。 方法: 1.诱导含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白rVvhA，应用Ni2+-NTA亲和层析对rVvhA进行纯化，通过分步稀释与透析复性相结合方法对纯化后蛋白进行复性。 2.将rVvhA作用于人Caco-2细胞，应用CCK-8法测试复性后rVvhA细胞毒活性。发现在1.5HU/ml浓度时，抑制Caco-2细胞生长明显。 3.RT-PCR检测rVvhA作用Caco-2细胞后IL-8mRNA的表达、ELISA检测细胞培养上清IL-8分泌量。 结果: 1.含pET-28a(+)vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌经0.5mmol/L IPTG30℃诱导4h后表达的融合蛋白分子量约为54kDa，电泳结果与该蛋白的理论预测值基本一致，表达量约为67％。表达的蛋白包涵体经三步洗涤与Ni2+-NTA树脂纯化后，纯度达99％。 2.纯化后的rVvhA经复性液复性后，作用于Caco-2细胞，发现rVvhA有细胞毒活性，能降低Caco-2细胞存活率，呈时间剂量依赖性。 3.RT-PCR检测出rVvhA作用Caco-2细胞后IL-8mRNA表达上调，rVvhA有效作用浓度为0.4HU/ml，效应时间为30min;上清中IL-8分泌量上调时相在4h。 结论: rVvhA在转录水平上诱导人Caco-2细胞IL-8mRNA表达，促进IL-8的合成，在创伤弧菌引起的过度炎症反应和败血症的发生、发展中有着重要意义。