【摘 要】
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当前基于T7 RNA聚合酶的表达系统(简称T7表达系统,由T7启动子及T7 RNA聚合酶组成)已广泛用于高效表达重组蛋白,这得益于T7 RNA聚合酶的较高的活性和特异性.但T7 RNA聚合酶的
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当前基于T7 RNA聚合酶的表达系统(简称T7表达系统,由T7启动子及T7 RNA聚合酶组成)已广泛用于高效表达重组蛋白,这得益于T7 RNA聚合酶的较高的活性和特异性.但T7 RNA聚合酶的过高活性又经常给重组菌的质粒稳定性和目的蛋白产量带来负面影响.尤其是表达毒性蛋白时更是如此.在本文中,作者详细研究了各种培养条件对质粒稳定性及目的蛋白产量的影响,其中包括选择压力、培养温度、目的蛋白毒性和葡萄糖的代谢物抑制等.在研究结果的基础上,作者采取了降低工程菌(pET28a-LansB-C-GLP-2/BL21)内T7 RNA聚合酶的活性或量的措施,如低温诱导,在培养基中加入葡萄糖等,都在很大程度上提高了质粒稳定性的目的蛋白产量.但诱导后补加抗生素这一普遍采用的提高质粒稳定性的方法却没有效果,这一反常现象可能也和T7 RNA聚合酶的过高活性有关.作者的整个研究集中在培养条件、T7 RNA聚合酶活性和质粒稳定性及目的蛋白产量几者之间的关系上,这必将对T7表达系统理论研究和实践应用提供借鉴.
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