精子介导的人凝血因子IX转基因绵羊技术研究

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本研究首次探讨和初步确定了公羊精子供体的筛选程序。首先利用绵羊常规育种参数(射精量、精子密度及精子畸形率、精子活率),尤其注重候选公羊原精的平均活力、两次稀释、冲洗后及在17℃的水浴中温育2H后的平均精子活力对21只候选公羊进行初步筛选,然后再检测了公羊精子膜结构和功能的完整性(ORT和SYBR-14/PI),最后比较了不同个体精子对外源DNA的不同浓度的反应,最终从21只公羊中确定了2只公羊作为精子供体。 本研究首次探讨了绵羊精子介导的转基因技术的分子机理。比较了精子在不同的离子条件下(SFM和TALP+Ca2+、TALP-Ca2+)中的超激化运动;进行了内化入精子核中的质粒DNA拯救实验;进一步研究了精子同外源DNA之间的相互作用,比较了不同的离子条件下不同DNA构建体的分裂模式,为进一步研究SMGT的分子机理提供有益的参考。
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