论文部分内容阅读
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia,KP)是一种常见的条件致病菌,适应环境能力强,易产生耐药性,广泛存在于医院环境,特别是重症监护病房,从而引起医院感染。但近年来,出现了一种以肝脓肿为首发症状的、社区获得性的、造成健康人群侵袭性感染的KP。这种特殊的KP被定义为高毒力肺炎克雷伯菌(Hypervirulent Klebsiella pneumonia,HVKP),其菌落具有明显的粘液性,毒力明显高于普通KP,感染可引起肝脓肿、脑膜炎、坏死性筋膜炎、眼内炎和严重的肺炎,其进展快、预后差,可危及生命。另一方面,根据上海市耐药监测网数据显示,耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia,CRKP)的检出率逐年升高。长久以来,这类多重耐药的KP并不被认为是高毒力菌株,但近年来出现了多重耐药的HVKP的报道,这类高毒力、高耐药细菌的出现将会给临床治疗带来极大困难。本研究旨在对CRKP和HVKP进行分子流行病学调查,从而确定其主要的流行株及其耐药机制,以比较两者的毒力谱区别。并构建小鼠菌血症模型,通过动物体内实验,对CRKP、HVKP以及CR-HVKP进行毒力比较,观察其感染特点,这对医院感染控制、临床治疗以及后续KP的毒力和耐药之间联系机制的研究具有重要意义。第一部分耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌和高毒力肺炎克雷伯菌分子流行病学和毒力特征分析为了解CRKP和HVKP的临床流行特点,对其进行分子流行病学调查和毒力特征分析,我们收集2015年临床分离的84株CRKP和67株HVKP,先进行菌种鉴定和抗生素药物敏感性试验,并采用PCR方法检测碳青霉烯酶基因、毒力基因和荚膜血清型,再利用多位点序列分型(MLST)方法对其进行分子分型。结果发现,CRKP主要来自于ICU科室,对常用抗菌药物表现为高度耐药,KPC基因携带率达90.5%,MLST分型主要为ST11(84%)。而HVKP则多来自于外科和门急诊,对抗菌药物普遍较敏感,MLST分型主要分为ST65(19%)、ST23(12%)和ST86(12%),荚膜血清型主要是K1(19%)和K2(45%),其中ST23均为K1型,ST65和ST86均为K2型。HVKP有六个毒力基因magA、allS、iut A、rmpA、kfu和Ytbs携带率均明显高于CRKP(p<0.001)。以上结果说明了CRKP多源于医院感染,主要流行株为产KPC的ST11型;而HVKP则多源于社区感染,对常用抗菌药物敏感性较高,毒力基因携带率高于CRKP,表明HVKP比CRKP可能有更强的毒力。第二部分构建小鼠菌血症模型比较耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌和高毒力肺炎克雷伯菌感染特点和毒力为了解CRKP和HVKP的感染特点并比较其毒力,我们分别选取了10株CRKP和HVKP、8株CR-HVKP来构建小鼠菌血症模型。通过对小鼠生存曲线、血液和重要脏器组织匀浆CFU计数、病理组织切片的观察,比较三组细菌的毒力差异。结果发现,HVKP感染小鼠组的死亡率明显高于CRKP和CR-HVKP感染组(p<0.001);同时,HVKP感染小鼠组血液、肝脏和肾脏中的细菌CFU计数也明显高于CRKP和CR-HVKP感染组(p<0.001);HVKP感染组小鼠肝脏和肾脏匀浆的革兰染色涂片可见较多粗大的革兰阴性杆菌,且其肝脏组织病理切片内可见感染灶,而CRKP和CR-HVKP感染组则不明显。以上结果表明,HVKP的毒力远高于CRKP和CR-HVKP,而CRKP和CR-HVKP在毒力比较中无统计学差异。综上所述,本课题研究的84株CRKP的分子分型主要是产KPC的ST11型,此型KP已快速在全球蔓延传播,几乎对所有抗生素耐药,主要来自于重症监护病房,需引起医院感控部门高度重视。67株HVKP的分子分型较为分散,比CRKP有更高的毒力基因携带率。我们通过动物体内实验进一步明确,HVKP比CRKP和CR-HVKP有更高的毒力,而CR-HVKP菌落虽然具有高粘液表型,但其毒力远低于HVKP,趋于和CRKP相同。本课题的研究结果为后续探究肺炎克雷伯菌耐药和毒力之间的关联奠定了一定的实验基础。