番茄TTOM1基因的克隆及其RNA沉默表达载体的构建

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根据本实验室克隆的番茄TTOM1基因的全长cDNA序列设计一对特异性引物,用PCR的方法获得番茄TTOM1基因。该基因长6726bp,包含有11个外显子和10个内含子11个外显子的长度依次为150,91,55,88,73,82,38,68,56,74和90,10个内含子的长度依次为680,87,874,78,830,202,126,2281,447和78bp。通过构建RNA沉默表达载体(RNA干扰表达载体、病毒表达载体等),用三亲结合的方法将其导入农杆菌EHA105中,并侵染番茄Flamingo-Bill外植体,获得3株转基因番茄。PCR反应及Southern杂交实验表明,外源基因片段已经插入到番茄的染色体中。
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