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目的通过建立动脉粥样硬化(AS)家兔模型,观察补肾益气复方软脉煎对AS家兔模型血清血脂,血管形态学的改变,以及基于PI3K/Akt/mTOR信号通路观察软脉煎对AS自噬的影响,探求软脉煎治疗AS新靶点。方法1.家兔分为正常组、模型组、软脉煎组,采用空气干燥术加高脂肪饲料喂养建立AS模型。2.家兔腹主动脉采血,分光光度计检测测血清中血脂指标:甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量。3.取颈总动脉,进行石蜡切片、HE染色,于显微镜下观察斑块形态。4.自噬标志物LC3蛋白:Western Blot法、免疫荧光法、免疫组化法、激光共聚焦法检测。5.自噬体形成关键蛋白Atg5、PI3K/Akt/mTOR信号通路各蛋白:Western Blot法、免疫组化法检测。结果1.血脂指标比较:与正常组相比,模型组、软脉煎组TC、TG、LDL-C水平均升高(P<0.05),模型组HDL-C水平下降,但无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,软脉煎组TC、TG、LDL-C水平均降低(P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.05)。2.HE染色观察:家兔颈总动脉斑块面积,正常组明显小于模型组、软脉煎组;软脉煎组斑块面积明显小于模型组。3.自噬标志物LC3II结果:(1)Western Blot法检测结果:在斑块组织处,与正常组相比,模型组LC3II/LC3 I比值上升,但无明显变化(P>0.05),与模型组相比,软脉煎组LC3II/LC3 I比值下降,差异有统计学意义(P<0.05);在斑块旁病变组织处,与正常组相比,模型组LC3II/LC3 I比值下降,但无明显变化(P>0.05);与模型组相比,软脉煎组LC3II/LC3 I比值有显著上升(P<0.01)。(2)免疫组化检测结果:在斑块组织处,与正常组相比,模型组LC3II蛋白表达上升,但无明显变化(P>0.05),与模型组相比,软脉煎组LC3II蛋白表达显著下降(P<0.001);在斑块旁病变处,与正常组相比,模型组LC3II蛋白表达显著下降(P<0.001),与模型组相比,软脉煎组LC3II蛋白表达显著上升(P<0.01)。(3)免疫荧光检测结果:斑块组织处,模型组与正常组相比,LC3Ⅱ蛋白表达上升;与模型组相比,软脉煎组LC3Ⅱ蛋白表达下降;斑块旁病变组织处,模型组与正常组相比,模型组LC3Ⅱ蛋白表达下降;与模型组相比,软脉煎组LC3Ⅱ蛋白表达上升。(4)激光共聚焦检测结果:在斑块组织处,模型组与正常组相比,LC3Ⅱ表达上升;与模型组相比,软脉煎组LC3Ⅱ表达下降;在斑块旁病变组织处,模型组与正常组相比,LC3Ⅱ表达下降;与模型组相比,软脉煎组LC3Ⅱ表达上升。4.自噬体形成关键蛋白Atg5检测结果:(1)Western Blot法检测:在斑块组织处,模型组与正常组相比,Atg5蛋白表达明显上升(P<0.05)。与模型组相比,软脉煎组Atg5蛋白表达明显下降(P<0.05);在斑块旁病变组织处,模型组与正常组相比,Atg5蛋白表达显著下降(P<0.001);与模型组相比,软脉煎组Atg5蛋白表达明显上升(P<0.05)。(2)免疫组化法检测:在斑块组织处,模型组与正常组相比,Atg5蛋白表达上升,但无明显变化(P>0.05);与模型组相比,软脉煎组Atg5蛋白表达显著下降(P<0.01);在斑块旁病变组织处,模型组与正常组相比,模型组Atg5蛋白表达下降,但无明显(P>0.05);与模型组相比,软脉煎组Atg5蛋白显著表达上升(P<0.01)。5.PI3K/Akt/mTOR信号通路检测结果:(1)Western Blot法检测:在斑块组织处,模型组与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt表达下降,但无明显变化(P>0.05),Akt、mTOR、p-mTOR表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,软脉煎组PI3K、mTOR表达显著上升(P<0.001),Akt、pAkt表达显著上升(P<0.01),p-mTOR表达上升,差异有统计学意义(P<0.05);在斑块旁病变组织处,与模型组相比,软煎组PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫组化法检测:在斑块组织处,模型组与正常组相比,PI3K、p-Akt、mTOR表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);Akt、p-mTOR表达下降,但无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,软脉煎组PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达上升,差异有统计学意义(P<0.05);在斑块旁病变组织处,模型组与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt、mTOR表达上升,差异有统计学意义(P<0.05),Akt、p-mTOR表达上升,但无明显变化(P>0.05);与模型组相比,软脉煎组PI3K、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),Akt表达下降,但无明显变化(P>0.05)。结论1.软脉煎能够缩小AS家兔模型颈动脉斑块面积,降低血脂中TC、TG、LDLC水平,升高HDL-C水平。2.在斑块组织中,软脉煎可以下调自噬相关基因Atg5、LC3Ⅱ蛋白,上调PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白水平,促进PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制过度自噬。3.在斑块旁病变组织中,软脉煎可以上调自噬相关基因Atg5、LC3Ⅱ蛋白,下调PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR蛋白水平,抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,促进一定水平的细胞自噬,有效防治AS。4.补肾益气中药复方对治疗AS行之有效,调控不同自噬程度。在AS斑块形成早期,通过促进自噬防治AS;在AS斑块形成晚期,通过抑制过度自噬稳定AS斑块。PI3K/Akt/mTOR信号通路可能是软脉煎防治AS的有效机制和靶点。