稻瘟病菌丝氨酸蛋白酶受体的筛选

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:water198206
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)是重要的植物病原真菌,也是研究丝状真菌的重要模式生物。稻瘟病菌丝氨酸蛋白酶可能作为稻瘟病菌分泌到细胞外与寄主受体蛋白起作用的激发子之一。稻瘟病菌的MGG07965.5基因编码丝氨酸蛋白酶。提取稻瘟病菌70-15菌株的总RNA,逆转录成cDNA后扩增MGG07965.5基因,构建了pPICH-ser表达载体,并转入毕赤酵母GS115中。利用pPICH载体上带有的6×His标签,表达和纯化丝氨酸蛋白酶。为了研究丝氨酸蛋白酶在植物防卫反应中的作用,构建pBD-GAL4-ser诱饵质粒,将其转入酵母菌株AH109中,判定其是否有自激活发生,并鉴定了重组诱饵蛋白的毒性。结果表明,重组诱饵质粒无自激活发生,并且重组诱饵蛋白无毒性。以转化诱饵质粒的AH109菌株与水稻的cDNA酵母文库进行杂交,筛选与丝氨酸蛋白酶有互作关系的酵母克隆。经过两轮的缺陷型培养基SD/Trp-/Leu-/Ade-的筛选和SD/Trp-/Leu-/Ade-/X-α-gal筛选,得到了32个克隆。提取这些酵母克隆菌株的质粒后转入大肠杆菌DH5α中,重新提取大肠杆菌的质粒,并将其一一进行回复性杂交实验。然后用β-半乳糖苷酶检测阳性克隆内LacZ报告基因的表达同时,以pAD-GAL4载体上的通用引物扩增阳性质粒,并将其送去测序。最终获得了12个阳性克隆菌株并对其进行生物信息学分析。结果表明,12个阳性克隆菌株中有4个捕获到的序列为pAD-GAL4载体序列。将剩下的8个菌株进行分类,与蛋白质代谢有关的有3个,与脂类代谢相关的有1个,与离子通道相关的有1个。另外2个未知功能。研究结果将有助于进一步研究稻瘟病菌丝氨酸蛋白酶与水稻相应受体的互作机制和生物学功能。
其他文献
苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是自然界中一种分布广泛的革兰氏阳性产孢细菌,占据着全世界95%的微生物农药市场。除了对许多目的昆虫具有特异性的毒杀作用外,
水稻是世界上种植面积最大的作物,而近年来随着全球气候的变化,水稻的种植生长环境亦发生改变,尤其高温天气对其造成严重的胁迫,导致水稻减产。已有很多文章对此现象进行了分析,主要是从高温对水稻颖花不能正常授粉,从而导致减产的角度进行分析的,而我们是利用双向电泳技术,模拟了高温(42℃)干旱的环境对水稻颖花蛋白质组学的变化的角度进行分析的,找到了25个蛋白点上调,20个点下调,分析认为其可能起到对逆境的应
不同采伐更新模式对森林群落的影响,一直是森林生态学领域关注的研究前沿。米槠(Castanopsis carlesii)群落是我国亚热带地区所特有、具有相对稳定的顶级群落,由于各种采伐更新
林线无论对于全球气候变化还是人类干扰均极端敏感,是环境变化很好的指示器,近年来成为全球变化研究中的热点问题。土壤微生物参与陆地生态系统物质循环和能量流动,在土壤生
泡沫病毒属于反转录病毒科泡沫病毒亚科,其在体外虽可使细胞发生强烈病变,在体内却不表现任何病症,处于长期潜伏感染状态,而其潜伏机制目前尚不清楚。目前为止,只有一篇关于
纳米材料的分散性能够影响它们的功能和在水溶液里悬浮能力,进而影响它们的应用,因此,提高纳米材料的分散性具有重要的意义。凹凸棒土分散成单一的纳米棒晶体结构对其发挥一
本文研究紫萁不同器官间黄酮含量比较,对紫萁中黄酮类化合物的抗氧化性质及其醇提物抑菌活性进行研究。  采集同一环境不同生长时期的紫萁,经过杀青、烘干、粉碎、脱脂、乙醇
本论文建立了2,4-二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法直接检测β-丙氨酸与L-天(门)冬氨酸的新方法。该方法色谱条件为:色谱柱为Zorbax SB C18柱(5μm,4.6~*250mm);流动相A为0.02mol/LNaAc-HAc缓冲液,pH6.2,流动相B为乙腈,采用线性梯度洗脱:时间(min)0→20,流动相B(体积百分含量,%)5→33;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;检测器为紫外